[发明专利]一种提高Fab抗体表达量的方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种基因工程中提高Fab抗体表达量的方法。该方法包括：构建重组质粒pVEGF‑Fab，制备特定的蛋白酶缺陷性细胞突变株（△pepN、△DegQ、△dcp和△pepP），转化，诱导表达Fab抗体等步骤。本申请对于宿主细胞株的改造较为特殊和新颖，所制备宿主细胞株由于特定蛋白酶缺失，可较好解除对Fab表达后抑制或降解作用，从而提高Fab表达量，因而对于特定的Fab抗体表达制备具有较好地应用价值，同时也为其他抗体蛋白表达和制备提供了较好的借鉴和参考，因而具有较好的实用价值和科研意义。

主权项

一种提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）按照现行常规转基因操作方法，构建重组质粒pVEGF‑Fab；（2）制备特定的重组大肠杆菌表达菌株，具体过程为：首先，人工合成pepN、DegQ、dcp和pepP的整合盒，与pKO3质粒进行连接，分别构建重组质粒pKO3‑pepN、pKO3‑DegQ、pKO3‑dcp和pKO3‑pepP；所构建的重组质粒pKO3‑pepN中，含有如SEQ ID NO.1所示的敲除突变的pepN基因；所构建的重组质粒pKO3‑DegQ中，含有如SEQ ID NO.2所示的敲除突变的DegQ基因；所构建的重组质粒pKO3‑dcp中，含有如SEQ ID NO.3所示的敲除突变的dcp基因；所构建的重组质粒pKO3‑pepP中，含有如SEQ ID NO.4所示的敲除突变的pepP基因；其次，将所构建重组质粒pKO3‑pepN、pKO3‑DegQ、pKO3‑dcp和pKO3‑pepP同时转化到大肠杆菌感受态细胞中，并进行筛选，获得蛋白酶缺陷性细胞突变株（△pepN、△DegQ、△dcp和△pepP）；（3）将步骤（1）所构建的重组质粒pVEGF‑Fab转化到步骤（2）所改造制备的化学感受态的蛋白酶缺陷性细胞突变株（△pepN、△DegQ、△dcp和△pepP）中，进一步进行诱导表达Fab抗体。