[发明专利]一种提高Fab抗体表达量的方法

权利要求书

1.一种提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）按照现行常规转基因操作方法，构建重组质粒pVEGF-Fab；

（2）制备特定的重组大肠杆菌表达菌株，具体过程为：

首先，人工合成pepN、DegQ、dcp和pepP的整合盒，与pKO3质粒进行连接，分别构建重组质粒pKO3-pepN、pKO3-DegQ、pKO3-dcp和pKO3-pepP；

所构建的重组质粒pKO3-pepN中，含有如SEQ ID NO.1所示的敲除突变的pepN基因；

所构建的重组质粒pKO3-DegQ中，含有如SEQ ID NO.2所示的敲除突变的DegQ基因；

所构建的重组质粒pKO3-dcp中，含有如SEQ ID NO.3所示的敲除突变的dcp基因；

所构建的重组质粒pKO3-pepP中，含有如SEQ ID NO.4所示的敲除突变的pepP基因；

其次，将所构建重组质粒pKO3-pepN、pKO3-DegQ、pKO3-dcp和pKO3-pepP同时转化到大肠杆菌感受态细胞中，并进行筛选，获得pepN、DegQ、dcp和pepP基因缺陷细胞突变株；

（3）将步骤（1）所构建的重组质粒pVEGF-Fab转化到步骤（2）所改造制备的化学感受态的pepN、DegQ、dcp和pepP基因缺陷细胞突变株中，进一步进行诱导表达Fab抗体。

2.如权利要求1所述提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述大肠杆菌为K-12菌株家族。

3.如权利要求2所述提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，所述大肠杆菌菌株为W3110、MG1655或W3101。

4.如权利要求1所述提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，步骤（1）中，利用pETDuet-1质粒进行重组质粒的构建。

5.如权利要求4所述提高Fab抗体表达量的方法，其特征在于，步骤（1）中，对Fab抗体的编码基因进行了优化，基因优化方式为：

轻链之前添加OmpA氨基酸编码序列；

在重链Fd段之前添加OmpA氨基酸编码序列。