[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A的热稳定性的方法

摘要

本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先从RCSB数据库中获取其晶体结构，再利用分子动力学分析其不同Loop区域的柔性；经由上述理性分析，并结合“脯氨酸效应”理论，将筛选得到柔性较高Loop区域的甘氨酸残基突变为脯氨酸；再通过分子动力学模拟验证筛选得到的突变结果；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。

主权项

一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A的热稳定性的方法，其特征在于包括如下步骤：1) 获取枯草芽孢杆菌脂肪酶A晶体结构，通过分子动力学分析其蛋白结构中柔性较高的Loop区域；2) 结合脯氨酸理论效应分析确定位于柔性较高Loop区域的甘氨酸残基；3) 基于对酶结构与功能关系的认知，采用分子动力学模拟技术解析将相关甘氨酸位点置换为脯氨酸后对枯草芽孢杆菌脂肪酶A蛋白结构稳定性的影响；4) 构建枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变体并验证其热稳定性，获得热稳定性得到提高的枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株。