[发明专利]一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺

权利要求书

1.一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

S1：配制TB培养基：胰蛋白胨20-30g/L、酵母提取物40-60g/L、K₂HPO₄ 70-75 mM、KH₂PO₄ 15-20 mM、第一诱导剂0.8-1.2mM、第二诱导剂0.05-0.1g/L、蛋白保护剂0.5-1g/L、甘油3-5g/L、余量为水；

所述第一诱导剂为卵磷脂；

所述第二诱导剂由泛酸、延胡索酸按1:(0.1-0.3)的质量比混合而成；

S2：一级种子培养：将大肠杆菌生产种子接种至LB培养基，于温度为36-38℃、摇床转速为180-220r/min的条件下，震荡过夜培养，所述大肠杆菌生产种子为表达重组人源化胶原蛋白的大肠杆菌E.coil BL21(DE3)；

S3：发酵培养：将S2所得一级种子接种至含有TB培养基的发酵罐内，36-38℃发酵培养12-18h；

S4：诱导表达：当发酵罐内发酵体系的光密度OD值达到3-5时，调整诱导温度设置为15-20℃，低温诱导20-28h。

2.根据权利要求1所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，所述大肠杆菌生产种子占LB培养基的质量百分比为0.2-0.3%。

3.根据权利要求1或2所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，所述LB培养基配方及比例为：胰蛋白胨10-15g/L、酵母提取物25-35g/L、葡萄糖6-10g/L、余量为水。

4.根据权利要求1所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，所述一级种子占TB培养基的质量百分比为1.8-2.2%。

5.根据权利要求1所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，所述发酵罐的参数设置如下：pH=6.8-7.2，溶解氧DO值为37-43%，搅拌速度为450-550r/min，通气量为2.8-3.2 L/min。

6.根据权利要求1所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，所述蛋白保护剂为甘露醇。

7.根据权利要求1或6所述的一种提高重组人源化胶原蛋白表达水平的发酵工艺，其特征在于，S1中，配制TB培养基：胰蛋白胨25g/L、酵母提取物50g/L、K₂HPO₄ 72 mM、KH₂PO₄ 17mM、第一诱导剂1mM、第二诱导剂0.08g/L、蛋白保护剂0.8g/L、甘油4g/L、余量为水；

所述第一诱导剂为卵磷脂；

所述第二诱导剂由泛酸、延胡索酸按1:0.2的质量比混合而成。