[发明专利]一种提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法在审
| 申请号： | 202310350500.7 | 申请日： | 2023-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN116656756A | 公开（公告）日： | 2023-08-29 |
| 发明（设计）人： | 梁晓丽;曹宇飞;谭舒雅;刘开泉;赵彦;李玲;徐衍鹏;张淑玥;聂士昊;顾杰瑞 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学（山东省科学院） |
| 主分类号： | C12P17/12 | 分类号： | C12P17/12;C12N1/21;C12N15/52;C12N15/53;C12N15/55;C12N15/78;C12R1/38 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 郑平 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 绿针假单胞菌中 吩嗪 羧酸 产量 方法 | ||
1.一种提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，包括
以绿针假单胞菌Qlu-1为出发菌株，敲除修饰基因phzO，获得菌株QPCA；
以所述菌株QPCA为出发菌株敲除AraG基因和/或CheB基因，获得菌株QPCAΔA、QPCAΔC、QPCAΔAΔC中至少一种；
以所述菌株QPCAΔA、QPCAΔC、QPCAΔAΔC中至少一种发酵生产吩嗪-1-羧酸，即得。
2.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述AraG基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述敲除AraG基因的具体步骤包括：
采用PCR钓取并连接AraG基因的上下游片段，得到AraG-UD片段；
将所述AraG-UD片段连接质粒pk18moBsacB构建重组质粒pk18-AraG-UD；
将所述重组质粒pk18-AraG-UD导入大肠杆菌S17-1(λ)，再与假单胞菌Qlu-1进行双亲杂交培养，
筛选阳性克隆，即得Qlu-1 AraG敲除株。
4.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述AraG-UD片段的序列如SEQ ID NO.2所示。
5.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，AraG基因敲除引物序列包括：AraG-F1、AraG-R1、AraG-F2、AraG-R2，序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。
6.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述CheB基因序列如SEQ ID NO.7所示。
7.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述CheB基因上下游融合片段CheB-UD的序列如SEQ ID NO.8所示。
8.如权利要求1所述的提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量方法，其特征在于，所述CheB基因敲除引物序列括：CheB-F1、CheB-R1、CheB-F2、CheB-R2，序列分别如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示。
9.一种用于提高绿针假单胞菌中吩嗪-1-羧酸产量的工程菌，其特征在于，以绿针假单胞菌Qlu-1为出发菌株，敲除修饰基因phzO，获得菌株QPCA；
以所述菌株QPCA为出发菌株敲除AraG基因和/或CheB基因，获得菌株QPCAΔA、QPCAΔC、QPCAΔAΔC中至少一种。
10.一种菌剂，其特征在于，包括：权利要求9中至少一种工程菌。
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