[发明专利]一种提高HCP检测抗体覆盖率的抗体组合及其应用

说明书

本发明公开了一种提高HCP检测抗体覆盖率的抗体组合及其应用。所述抗HCP抗体组合使用抗原分别免疫动物后制备得到；所述抗原包括低免疫原性HCP。本发明通过分级HCP免疫的方法进行抗体的制备，通过抗体配比组合优化，使得检测方法获得较高的检测灵敏度，同时满足高覆盖率要求。利用本发明的抗HCP抗体组合可尽可能多地识别含有大量蛋白分子的HCP抗原。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及一种提高HCP检测抗体覆盖率的方法。

背景技术

在传统化学药物开发难度及成本越来越大的形势下，目前，由于生物技术类药物的诸多优势，其在全球范围内已得到迅猛的发展。生物技术类药物种类较多，包括重组蛋白类药物，例如单抗，重组蛋白疫苗等；细胞及基因治疗药物(cell and gene therapy，CGT)，例如CAR-T，溶瘤病毒等；mRNA治疗技术，例如mRNA疫苗等。这些生物技术类药物的生产工艺比较复杂，会引入较多的杂质，对药物的质量产生潜在的负面影响，因此监管层对生物技术类药物的质量控制也提出了更高的要求。

目前生物技术类药物始终需要通过工程类细胞，如细菌、酵母或哺乳动物、昆虫或植物细胞系等，来进行原料的生产。经典的重组蛋白表达技术已在许多生物制药产品中得到广泛的应用，主要采用宿主细胞进行外源蛋白质的表达和修饰。CGT药物生产关键物料，如质粒，也是在大肠杆菌中扩增纯化获取。基因治疗的假病毒载体需要在HEK293等细胞内重新合成组装。在这类产品的生产过程中，宿主细胞来源的蛋白质(host cell proteins，HCP)会不可避免地被引入到生产工艺流程中，从而产生最终药品中HCP的残留风险。科学研究已发现生物制药产品中残留HCP的主要危害是其有诱导机体产生抗HCP抗体的可能性，这些抗体可能会引起患者产生临床症状。此外，HCP可能作为免疫佐剂，诱导产生抗药抗体，影响药物安全性或有效性，因此全球各个国家的监管机构对HCP残留都有严格的限量要求。

目前，HCP的分析检测方法较多，其中HCP ELISA方法由于其操作方便快捷，成本较低，检测通量较高等优点，已被监管机构和企业广泛运用于纯化工艺开发和原液的放行检中。HCP ELISA检测方法原理是采用多克隆抗体的双抗体夹心法，其中关键点之一是采用的多克隆抗体能识别尽可能多的HCP，即高覆盖率，否则会导致漏检的风险。高覆盖率的HCP抗体是HCP ELISA检测方法验证的关键参数之一。由于HCP是多种蛋白质的复合物，分子量从5kDa到250kDa，等电点在3-11区间，常规方法制备的抗体覆盖率往往不够理想，并且直接导致实际样本的检测适用性低，漏检的风险高。

发明内容

为了克服上述样本检测适用性低、覆盖率低，且检测灵敏度、检测效率不高的缺陷，本发明提供一种提高HCP检测抗体覆盖率的方法。

本方法是针对HCP抗原，其含有上千种以上的蛋白分子，如何使获得的多克隆抗体尽可能多地识别这些HCP抗原是目前需要解决的关键问题。从动物产生抗体的免疫学原理来理解，需要合适的抗原量，免疫周期和途径等方面进行优化。并且抗原本身分子量大小也会影响抗体的产生。因此，用总的HCP抗原免疫会导致对某些HCP抗原的免疫反应较弱，无法获得抗体。

本发明通过将低分子量分离，提升对低分子量HCP抗原的免疫反应。通过将HCP抗原中高丰度或高分子的容易产生抗体和HCP抗原分离，加强对免疫原性低的抗原的免疫反应。

为了解决现有技术的缺陷，本发明第一方面提供一种抗HCP抗体组合，使用抗原分别免疫动物后制备得到各抗体的组合；所述抗原包括低免疫原性HCP，优选还包括以下抗原中的一种或多种：宿主细胞总HCP(host cell proteins)、低分子量HCP和高分子量HCP所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞；优选所述真核细胞为CHO细胞，所述原核细胞为大肠杆菌，所述大肠杆菌例如为Escherichia coli。