[发明专利]一种提高HCP检测抗体覆盖率的抗体组合及其应用

权利要求书

1.一种抗HCP抗体组合，其特征在于，使用抗原分别免疫动物后制备得到各抗体的组合；所述抗原包括低免疫原性HCP，优选还包括以下抗原中的一种或多种：宿主细胞总HCP、低分子量HCP和高分子量HCP；所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞；优选所述真核细胞为CHO细胞，所述原核细胞为大肠杆菌，所述大肠杆菌例如为Escherichia coli。

2.如权利要求1所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，所述低免疫原性HCP为所述宿主细胞总HCP经纯化得到的产物，和/或，所述低分子量HCP为分子量小于55KDa例如小于50KDa的HCP，和/或，所述高分子量HCP为分子量高于55KDa例如高于60KDa的HCP；和/或，所述动物为哺乳动物优选羊例如绵羊。

3.如权利要求1或2所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，所述抗原包括宿主细胞总HCP、低分子量HCP和低免疫原性HCP，或宿主细胞总HCP、低分子量HCP、高分子量HCP和低免疫原性HCP；由此得到的抗HCP抗体组合包括抗低免疫原性HCP抗体、抗总HCP抗体和抗低分子量HCP抗体，或抗低免疫原性HCP抗体、抗总HCP抗体、抗低分子量HCP抗体和抗高分子量HCP抗体。

4.如权利要求1～3任一项所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，获得所述宿主细胞总HCP的步骤包括：

(1)将宿主细胞例如E.coliBL21的菌溶液与裂解溶液混合例如以1:10的比例混合，混匀，获得混合菌液；所述菌溶液例如利用宿主细胞菌体与水混合而成；

(2)将所述混合菌液破碎后获得破碎菌液；

(3)将所述破碎菌液离心后获得的上清液即为宿主细胞总HCP；或，

所述宿主细胞总HCP通过以下步骤获得：将所述宿主细胞进行浓缩例如使用PEG20000进行浓缩，即得；

优选地，步骤(1)中，所述裂解溶液是由0.2M NaHCO₃溶液和蛋白酶抑制剂混合而得，pH为8.0-9.0例如为8.3；

步骤(2)中，所述破碎的压力为1000-1500bar例如1200bar，和/或，所述破碎的温度为10℃；

步骤(3)中，所述离心的速度为10000-15000g例如12000g，和/或，所述离心的温度为4℃。

5.如权利要求1～4任一项所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，所述低分子量HCP的制备方法为将所述宿主细胞总HCP经分子筛层析获得洗脱液，所述洗脱液即为所述低分子量HCP。

6.如权利要求1～5任一项所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，所述低免疫原性HCP由所述宿主细胞总HCP经FPLC纯化获得；

优选地，所述FPLC的步骤包括：

所述宿主细胞总HCP经过滤例如0.22μm滤膜过滤后上样，洗脱并收集洗脱液，即得所述低免疫原性HCP。

7.如权利要求6所述的抗HCP抗体组合，其特征在于，

所述FPLC使用偶联抗体纯化柱，制备所述偶联抗体纯化柱的步骤包括：

(a)用酸例如0.1M HCl清洗NHS活化胶；

(b)将所述抗总HCP抗体与所述NHS活化胶混匀，离心去除上清液；

(c)加入0.1-0.5M Tris-HCl例如0.1M Tris-HCl，pH8.0，混匀并孵育，使所述抗总HCP抗体与所述NHS活化胶发生偶联；所述混匀例如在室温下旋转2h，所述孵育例如在2-8℃培养15-20h；

(d)用缓冲液例如PBS清洗，将偶联合格例如偶联率90％的填料进行装柱；

优选地，所述的抗HCP抗体组合由抗总HCP抗体、抗低分子量HCP抗体和抗低免疫原性HCP抗体组成，优选其比例为(1～2):(1～2):1，例如为1:1:1。

8.一种试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1～7任一项所述的抗HCP抗体组合；优选地，还包括免疫相关的检测试剂，如缓冲液，例如PBS缓冲液。