[发明专利]一种提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法

权利要求书

1.一种提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、巨噬细胞激活和极化：将外周血单核细胞PBMC分化为巨噬细胞；加入25-100ng/mlIFN-γ和25-100ng/ml LPS,激活极化巨噬细胞6-48h；

S2、腺病毒转染巨噬细胞：向激活极化后的巨噬细胞中按照100-1000 MOI加入腺病毒，转染12-24h，转染目的基因。

2.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于， 所述步骤S1中，外周血单核细胞PBMC分化为巨噬细胞的具体方法为：将PBMC复苏后通过CD14磁珠进行阳性分选单核细胞，将分选后的单核细胞放入培养皿，添加25-100ng/ml GM-CSF促进单核细胞分化为巨噬细胞，达到规定的细胞接种密度后，将其放入CO₂培养箱，培养24-72h。

3.如权利要求2所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，细胞接种密度为0.5×10⁶～4×10⁶个/mL；所述CO₂培养箱的温度为35～38℃,CO₂浓度为3～7％。

4.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，所述的IFN-γ的浓度为40-60ng/ml ，LPS的浓度为40-60ng/ml 。

5.如权利要求4所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，所述的IFN-γ的浓度为50ng/ml，LPS的浓度为50ng/ml。

6.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，还包括步骤S3、转染后基因表达检测：将步骤S2中获得的腺病毒转染后的巨噬细胞，消化处理，200-500g 离心2-10min，收集细胞，通过流式检测目的基因的表达CAR:嵌合抗原受体。

7.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，所述的步骤1中，激活活化后的巨噬细胞为M1型巨噬细胞。

8.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，所述的腺病毒为Ad5F35腺病毒。

9.如权利要求1所述的提高腺病毒转染巨噬细胞效率的方法，其特征在于，所述的步骤2中，转染目的基因后，可以换液，继续培养细胞一段时间。