[发明专利]一种溶剂耐受性提高的环糊精葡萄糖基转移酶及其制备

权利要求书

1.一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸得到的；

或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸，同时将第146位的精氨酸突变为苯丙氨酸得到的；

或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸；同时将第146位的精氨酸突变为苯丙氨酸；同时将第147位的天冬氨酸突变为天冬酰胺得到的。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的重组载体。

4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，以pET系列载体、pUT系列载体或pBAD系列载体为表达载体。

5.表达权利要求1所述突变体，或携带权利要求2所述基因，或携带权利要求3或4所述重组载体的重组细胞。

6.如权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞以细菌或真菌为宿主细胞。

7.一种提高环糊精葡萄糖基转移酶对有机溶剂的耐受性的方法，其特征在于，所述方法为，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸；

或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸，同时将第146位的精氨酸突变为苯丙氨酸；

或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第539位的甘氨酸突变为异亮氨酸；同时将第146位的精氨酸突变为苯丙氨酸；同时将第147位的天冬氨酸突变为天冬酰胺。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂包括二甲基亚砜(DMSO)、乙醇、甲醇及丙酮中的一种或多种。

9.一种生产长链糖基化染料木素的方法，其特征在于，所述方法为，向含有可溶性淀粉和染料木素的反应体系中加入权利要求1所述的环糊精葡萄糖基转移酶突变体进行反应，得到反应液；将反应液进行分离，获得长链糖基化染料木素。

10.权利要求1所述的突变体，或权利要求2所述的基因，或权利要求3或4所述的重组载体，或权利要求5或6所述的重组细胞，在天然疏水性底物的糖基化应用，或在有机溶剂反应体系中的糖基化应用。