[发明专利]一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法

说明书

本发明公开了一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，涉及云南独蒜兰组织培养技术领域。本发明包括将成熟蒴果种子播于培养基上进行培养，诱导种子萌发阶段避光培养，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养；原球茎继续增殖形成苗和原球茎混杂的块状物；对继代增殖原球茎进行叶芽诱导和丛芽增殖；选取经叶芽诱导、丛芽增殖的小苗用于生根壮苗培养；且再次培养；最后进行炼苗培养。本发明通过提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法的应用，使得云南独蒜兰组培苗炼苗成苗率提高35％，成苗率提高20％，有效解决了独蒜兰炼苗成活率和成苗率低的问题，提高了云南独蒜兰种苗经济效益，为云南独蒜兰今后大规模种植提供优质种苗打下基础。

技术领域

本发明属于云南独蒜兰培养技术领域，特别是涉及一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法。

背景技术

云南独蒜兰〔Pleione yunnanensis(Rolfe)Rolfe〕，为兰科独蒜兰属的一种半附生兰，国内主要产于四川、贵州和云南，假鳞茎为中药山慈菇的主要来源之一。云南独蒜兰为《中国药典》收载品种，具有清热解毒、止咳化痰，止血生肌。主治肺结核，百日咳，气管炎，痈肿，消化道出血，外伤出血等。近年来，由于其含有抗肿瘤的活性，云南独蒜兰市场需求量不断增加。但其种子小，自然状态下很难成功萌发及生长，加之野生资源破坏严重，所以通过组织培养是获得大量完整再生植株的重要技术手段，亦是缓解资源环境压力的主要途径。

近年来有不少关于独蒜兰组织培养方面的报道，但是组培出来的种苗在炼苗过程中出现的问题还是较多，最根本的原因是其炼苗成活率和成苗率低，从而影响其种苗质量和产业化发展。

现有的云南独蒜兰和独蒜兰组培都是与传统的组培方式一致，无菌萌发、增殖培养、生根培养和炼苗，但是在组培过程中其组培苗假鳞茎过小，而叶片和须根较多，从而影响炼苗成活率和成苗率，传统组培出来的组培苗在最后的生根培养后，假鳞茎基本上只有1-2mm大小，每个培养瓶也只有30-35棵苗，通过延长其培养时间虽然能够部分增大假鳞茎，时间也需要50-60天，但是延长培养并不会导致假鳞茎数量的增加，使得后期炼苗成活率和成苗率仍然不高。为此，我们提供了一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，用以解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，解决了现有的云南独蒜兰和独蒜兰组培都是与传统的组培方式一致，在组培过程中其组培苗假鳞茎过小，而叶片和须根较多，从而影响炼苗成活率和成苗率的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，包括如下步骤：

步骤一、将云南独蒜兰开花后5-7天进行自交授粉获得蒴果，以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果作为外植体；

步骤二、对作为外植体的蒴果进行消毒杀菌，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分进行备用；

步骤三、剖开无菌蒴果取出种子，将种子播于培养基上并分散均匀，完成接种后将其置于培养室中培养，诱导种子萌发阶段避光培养，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养；

步骤四、在播种40d-50d后原球茎开始分化出叶，同时原球茎继续增殖，形成苗和原球茎混杂的块状物，原球茎经增殖培养30d后原球茎都能长出第1片叶芽，本阶段采用光照培养；

步骤五、选择大小适合的原球茎接种到不同激素种类和浓度的培养基上，对继代增殖原球茎进行叶芽诱导和丛芽增殖，本阶段采用光照培养；

步骤六、选取经叶芽诱导、丛芽增殖的小苗用于生根壮苗培养，本阶段采用光照培养；