[发明专利]一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法

权利要求书

1.一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一、将云南独蒜兰植株开花后5-7天内进行自交授粉获得蒴果，以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果作为外植体；

步骤二、对作为外植体的蒴果进行消毒杀菌，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分进行备用；

步骤三、剖开无菌蒴果取出种子，将种子播于萌发培养基上并分散均匀，完成接种后将其置于培养室中培养，诱导种子萌发阶段避光培养，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养；

步骤四、在播种40d-50d后原球茎开始分化出叶，同时原球茎继续增殖，形成苗和原球茎混杂的块状物，原球茎经增殖培养30d后原球茎都能长出第1片叶芽，本阶段采用光照培养；

步骤五、选择大小适合的原球茎接种到不同激素种类和浓度的培养基上，对继代增殖原球茎进行叶芽诱导和丛芽增殖，本阶段采用光照培养；

步骤六、选取经叶芽诱导、丛芽增殖的小苗用于生根壮苗培养，本阶段采用光照培养；

步骤七、把生根培养好的培养瓶苗放置在可以控制光照、温度的培养室中进行再次培养，再次培养分为三个阶段，第一阶段将温度控制在35℃，无光照的环境中培养25-30天，让高温抑制云南独蒜兰组培苗的生长，使叶子的光合作用降低，让原有的叶子黄化，把营养全部供给给假鳞茎，让假鳞茎膨大，等到叶子全部枯萎；第二阶段将培养温度降低至20℃继续培养25-30天，直至独蒜兰假鳞茎旁边有新的假鳞茎长出并出现新的芽点，第三阶段将培养温度提高至25℃继续培养25-30天，使第一阶段叶片黄化的假鳞茎再次长出新叶片，假鳞茎旁边长出的芽点也继续长大和长出叶片；

步骤八、把再次培养好的云南独蒜兰组培苗经过除培养基、消毒和分拣处理，置于炼苗棚中进行炼苗培养。

2.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤一具体为：把4-5月开花的云南独蒜兰在5-7天内进行自交授粉，授粉成功的继续培养4-5个月获得蒴果，以云南独蒜兰成熟且未开裂的蒴果为外植体。

3.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤二具体为：用适量清水加洗洁剂洗涤蒴果6min，然后用无菌水冲净蒴果表面的洗洁精，在超净工作台上将洗涤后的蒴果用75％的酒精进行表面消毒处理30s，再用0.1％的氯化汞消毒15min，然后用无菌水冲洗5-6次，用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分后备用。

4.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤三具体为：超净工作台上用消毒后的手术刀将消毒处理过的蒴果两端切除，纵向剖开蒴果，将种子播于萌发培养基上，轻轻晃动培养瓶使种子均匀散布，完成接种后将其置于培养室培养，诱导种子萌发阶段避光培养，温度为25℃，待种子萌发出原始球茎后采用光照培养，温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度1500lx。

5.根据权利要求1或4所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，用于种子萌发培养的所述培养基由以下几种组分构成：40g/L MS，0.25mg/L 6-BA，1.0mg/L NAA，1.0g/L蛋白胨，1.0g/L炭粉，该培养基的pH为5.8-6.0。

6.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤四中的培养条件为：温度25℃，光照时间12h/d，光照强度1500lx；培养基由以下几种组分构成：40g/L MS，1.5mg/L 6-BA，0.75mg/L NAA，1.0g/L蛋白胨，该培养基的pH为5.8-6.0。

7.根据权利要求1所述的一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法，其特征在于，所述步骤五中的培养条件为：温度25℃，光照时间12h/d，光照强度1200lx；培养基由以下几种组分构成：40g/L MS，1.5mg/L 6-BA，0.75mg/L NAA，1.0g/L蛋白胨，该培养基的pH为5.8-6.0。