[发明专利]提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法有效
| 申请号： | 202210566197.X | 申请日： | 2022-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN114854695B | 公开（公告）日： | 2022-12-27 |
| 发明（设计）人： | 李长路 | 申请（专利权）人： | 广州蕊特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/071;C12N15/85;C07K14/00 |
| 代理公司： | 北京维正专利代理有限公司 11508 | 代理人： | 姚启政 |
| 地址： | 510032 广东省广州市广州高新技术产业开发*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 球蛋白 hek 293 细胞 表达 水平 转染 培养 方法 | ||
1.一种提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，取HEK-293细胞稀释传代，保证活率≥90%，并取用密度为4-6×106个/mL、存活率大于98%的细胞作为转染细胞；
步骤2，直接往转染细胞中兑入培养液，将细胞密度稀释成3×106个/mL，形成培养基，备用；
步骤3，取4-6mL转染缓冲液与500-505μL转染试剂混匀，形成转染溶液；另取4-6mL转染缓冲液与100-105μg HUMAN Beta-2-microglobulin无菌质粒DNA混匀，形成DNA溶液；
步骤4，混合转染溶液以及DNA溶液，轻轻混匀，并在室温下静置10-12min，形成质粒-载体复合溶液；
步骤5，将步骤4形成的质粒-载体复合溶液逐滴滴加至步骤2制得的培养基中，并边滴加边轻轻摇动，滴加完成后，置于5%的CO2恒温摇床中，并于25-37℃以及135r/min的条件下震荡培养；
步骤6，培养24h后，添加100μL营养添加剂，并每间隔24h添加一次；
其中，所述培养液由以下浓度的组分组成：
葡萄糖70-80g/L；
酚红0.001-0.005mg/L；
谷丙氨酸二肽150-200mg/L；
维生素C 10-15mg/L；
羟乙基哌嗪乙硫磺酸2.5-3g/L；
碳酸氢钠100-120mg/L；
肌醇500-520mg/L；
氯化钙15-18mg/L；
氯化钾300-350mg/L；
氯化钠5-7g/L；
L-精氨酸450-470mg/L；
L-天冬氨酸60-70mg/L；
L-谷氨酸200-230mg/L；
L-组氨酸100-110mg/L；
L-异亮氨酸400-420mg/L；
L-赖氨酸450-460mg/L；
L-亮氨酸600-620mg/L；
L-缬氨酸450-460mg/L；
L-脯氨酸300-310mg/L；
丙酮酸钠0.3-0.8mL/L；
壳寡糖1-4mg/L；
叶酸0.05-0.2mg/L；
所述营养添加剂由以下浓度的组分组成：
L-精氨酸450-470mg/L；
L-天冬氨酸60-70mg/L；
L-谷氨酸200-230mg/L；
L-组氨酸100-110mg/L；
L-异亮氨酸400-420mg/L；
L-赖氨酸450-460mg/L；
L-亮氨酸600-620mg/L；
L-缬氨酸450-460mg/L；
L-脯氨酸300-310mg/L；
葡萄糖70-80g/L；
谷丙氨酸二肽20-25mg/L；
大豆水解物3-5g/L；
小麦水解物8-10g/L；
蚕豆水解物7-10g/L。
2.根据权利要求1所述的一种提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法，其特征在于：所述步骤2中，将细胞密度稀释成3×106个/mL后，将转染细胞以及培养液置于5%的CO2恒温摇床中，并于37℃以及135r/min的条件下震荡培养10-12min，形成培养基。
3.根据权利要求1所述的一种提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法，其特征在于：所述步骤3中的转染试剂为阳离子聚合物转染试剂。
4.根据权利要求3所述的一种提高β-2微球蛋白在HEK-293细胞中表达水平的细胞转染培养方法，其特征在于：所述转染试剂为STF02的Sinofection 转染试剂。
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