[发明专利]一种提高调节型T细胞稳定性和功能的方法

权利要求书

1.一种提高调节型T免疫细胞的诱导、表型稳定性及增强免疫调节功能的方法，其特征在于，包括抑制转录因子T-bet的表达或敲除TBX21基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转录因子T-bet的编码核酸包括SEQID NO:1、其简并序列或其剪接体核苷酸序列。

3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，所述转录因子T-bet蛋白包括SEQ IDNO:2、其剪接体或其变体的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于所述抑制转录因子T-bet的表达的方法或产品选自小RNA或多靶点多发卡结构的小RNA、核酶、基因打靶、蛋白抑制剂与化合物抑制剂；优选地，通过发卡结构的siRNA干扰；更优选地，所述siRNA的序列如SEQ ID NO:3-8所示。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于敲除TBX21基因的方法或产品选自CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶、TALEN。

6.根据权利要求1-5所述的方法，其特征在于，进一步包括外加或过表达一种或多种细胞因子组合的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞因子选自天然或重组的白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、促红细胞生长素、表皮生长因子、神经生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肿瘤坏死因子、血小板生成素、血小板衍生生长因子、干细胞因子、血管内皮生长因子；优选地，所述外加或过表达的细胞因子为TGF-β、IL-10或其联合。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述TGF-β选自TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3及其相应的前体分子(per-pro-TGF-β)、多肽链前体(pro-TGF-β)及成熟形式的(mTGF-β)；优选地，所述TGF-β为TGF-β1，所述TGF-β1的编码核酸包括SEQ ID NO:9、其简并序列或其剪接体核苷酸序列，所述TGF-β1蛋白包括SEQ ID NO:10、其剪接体或变体的氨基酸序列；更优选地，所述TGF-β为mTGF-β1，所述mTGF-β1编码核酸包括SEQ ID NO:11、其简并序列或其剪接体核苷酸序列，所述mTGF-β1蛋白包括SEQ-ID No.12、其剪接体或其变体氨基酸序列。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述IL-10编码核酸具有SEQ ID NO:13、其简并序列或其剪接体核苷酸序列，所述IL-10蛋白包括SEQ ID NO:14、其剪接体或其变体所示的氨基酸序列。

10.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括联合其他1个或多个基因的过表达、干扰或敲除，所述过表达的基因包括BCL-6，所述干扰或敲除的基因包括GATA-3、RORγt、RORα。

11.根据权利要求1-10任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步表达归巢分子CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CX3CR1或归巢分子组合，以促进Treg在体内向疾病部位趋化，提升治疗效果；优选地，所述归巢分子表达在病毒载体或mRNA载体上。

12.根据权利要求1-11任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步表达或连接能够识别疾病部位或移植器官特异性靶标的分子，包优选地，所述分子为嵌合抗原受体分子、组织特异性受体的配体。