[发明专利]一种提高调节型T细胞稳定性和功能的方法

说明书

本发明提供了一种基于抑制转录因子T‑bet技术联合细胞因子过表达用于提高调节型T细胞稳定性及免疫调节功能的方法。具体而言，所述抑制转录因子T‑bet技术包括发夹结构RNA干扰技术，所述的细胞因子包括TGF‑β和IL‑10。本发明提供的技术可以有效长期维持调节型T细胞在炎症性环境中的稳定性，尤其是针对诱导型调节T细胞的遗传学及功能稳定性具有显著的维持作用，对于解决调节型T细胞炎症环境功能不稳定性科学难题具有重要启示价值，在治疗自身免疫性疾病以及干预器官移植排斥等领域中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，特别涉及一种提高诱导性调节T细胞稳定性和功能的方法。

背景技术

调节型T细胞(Regulatory T Cell，Treg)是一群负调机体免疫反应的淋巴细胞，通过下调免疫效应细胞的增殖和功能从而维持机体免疫稳态，维持机体对自身或异体抗原的耐受性并防止过度免疫应答。长期以来，在过度免疫应答导致的疾病如过敏性疾病、自身免疫性疾病、及器官移植排斥等临床治疗中，主要采用系统性免疫抑制性药物或激素等进行干预。这类药物多是终身服用，易诱发肝脏损伤、骨髓抑制、代谢障碍、增加细菌与真菌感染以及肿瘤罹患风险。近年来，针对上述疾病，国内外逐渐开展Treg细胞干预的临床试验，以期替代或减少系统性免疫抑制性药物或激素用量，辅助免疫重建。

目前免疫治疗临床试验项目所选用的Treg细胞亚群相对单一，多采用胸腺来源的表观遗传学稳定的天然调节型T细胞(Natural Regulatory T Cell,nTreg)以保证Treg细胞在体内排斥性炎症环境中的谱系与功能稳定性。由于nTreg(CD4⁺CD25⁺)细胞外周血单个核细胞群(PBMC)中占比极低(0.1-0.7％)，需要采集患者外周血量较大，降低了患者的依从性及其安全性。而且，经PBMC体外扩增Treg细胞的技术方法主要是通过调整培养体系中的雷帕霉素及IL-2细胞因子剂量来促进细胞增殖，扩增技术的成熟度仍存在较大的提升空间。

近年来发现的诱导型调节T细胞(Induced Regulatory T Cell,iTreg)介导外来抗原的识别耐受、粘膜和环境耐受的能力较强，能够在移植耐受、过敏反应及慢性炎症中发挥良好的免疫负向调控功能。由Naive CD4⁺T细胞诱导分化而来的iTreg细胞，体外扩增培养体系所需的起始细胞数量充足且扩增周期缩短，有望突破nTreg细胞体外规模化扩增的制约。TGF-β信号通路调控着iTreg细胞分化的关键分子包括转录因子STAT3的表达和磷酸化及Foxp3基因的甲基化，因而，iTreg培养体系严重依赖外源添加细胞因子TGF-β，后者的大量添加增加了细胞生产成本，其添加时相、半衰期与功能稳定性等因素也需要全面考虑以进一步优化扩增体系的可控性。国际首次采用体外扩增的iTreg细胞干预移植排斥的临床试验由美国明尼苏达大学Margaret L.团队实施。主要观察iTreg负向调控造血干细胞移植后移植物抗宿主排斥反应的安全性与有效性。由于供体的采血量较大，初期筛选入组的共55对供受者中，只有14对最终能接受如此大量采血进入临床试验。在体外扩增培养体系终点iTreg细胞约占44％，体外负向调控效应细胞增殖的能力较弱，提示该iTreg细胞扩增体系尚待进一步优化。临床试验结果的有效性尚未确定。

由于iTreg表观遗传学稳定性较低，在高炎环境中极易丢失Foxp3的表达进而向炎症性效应T细胞极化，诱发炎症的风险加剧。此外，自身免疫疾病或器官移植排斥者体内长期处于炎症性免疫环境，自体分离出的Treg细胞功能低下，临床应用尚存在较大挑战。因此，如何有效维持iTreg细胞的表型和功能稳定性，进一步提升其免疫负向调控功能，是突破Treg细胞免疫治疗的技术瓶颈的关键所在。

发明内容

为了解决上述科学及技术问题，本发明第一方面提供了一种提高调节型T免疫细胞的诱导、表型稳定性及增强负向免疫调节功能的方法，所述方法包括抑制转录因子T-bet的表达或敲除TBX21基因。