[发明专利]用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒

权利要求书

1.用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒，其特征在于，选自pUS20D9M,pUS20XP1以及pUS20XP2中的任意一个；其中，质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，质粒pUS20XP2序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的质粒在提高枯草芽孢杆菌自发突变频率中的应用。

3.一种提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的方法，其特征在于将权利要求1中所述的任意一种质粒转染枯草芽孢杆菌在含有1%木糖的LB培养基中36℃-38℃培养10-14h。

4.质粒pUS20XP2的构建方法，其特征在于，通过同源重组将片段P_veg-sgmutSL融合到pUS20XP1上，生成质粒pUS20XP2；所述的片段P_veg-sgmutSL序列如SEQ ID NO.3中第6923bp~第7092bp所示；所述的质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，以质粒pUS20XP1为模板，用引物 P17/P18 扩增质粒pUS20XP1全部序列；以质粒pUS20D9M为模板，用引物 P19/P20扩增后得到片段P_veg-sgmutSL；然后，将上述2片段通过同源重组的片段融合成环状质粒；最终，将上述融合产物转化到大肠杆菌 DH5α后，经 100 ppm 氨苄青霉素筛选后得到质粒 pUS20XP2；其中质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，各引物序列如下所示：

 。