[发明专利]一种提高青蒿中青蒿素含量的方法

说明书

本发明公开了一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，所述方法包括如下步骤：将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列导入所述青蒿中，得到含有所述核苷酸序列的再生转基因青蒿。本发明提供的核苷酸序列编码SPL家族转录因子(AaSPL9)，利用转基因技术获得的再生转基因青蒿中青蒿素的含量明显提高，对青蒿素的规模化生产具有重要意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种提高青蒿中青蒿素含量的方法。

背景技术

植物新陈代谢分为初生代谢和次生代谢，初生代谢产物(如糖类、脂类和核酸)存在于所有植物中，是维持细胞生命活动所必需的，而植物次生代谢产物是指植物中一大类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物，其产生和分布具有种属、组织器官和生长发育特异性。在天然植株中产生的次生代谢产物含量极低，而使用化学合成的方法，工艺流程复杂、成本高。因此，研究人员开始探索其他的提高植物次生代谢产物含量的方法，在诸多方法之中，提高分泌型腺毛的密度被认为是一种直接有效的方法，分泌型腺毛是植物表皮细胞特化出的一种多细胞结构，近年来对腺毛的研究发现，许多有价值的次生代谢产物都是在这一结构中特异性合成和储存，比如以薄荷精油、玫瑰精油为代表的一大类天然香精香料；以青蒿素为代表的中草药有效成分；以啤酒花为代表的天然植物添加剂。

在腺毛中特异性合成的次生代谢产物有个共同的特点，即参与这些次生代谢产物合成的关键酶基因只在腺毛中特异表达。因此，利用基因工程的方法调控腺毛密度是颇具应用价值的植物遗传操作手段。在次生代谢领域，关于分泌型腺毛的报道还比较少，特别是在传统中草药青蒿的研究中。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是如何提高青蒿中青蒿素的含量。

为实现上述目的，本发明第一方面提供了如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列在提高青蒿中青蒿素含量中的应用。

本发明第二方面提供一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，所述方法包括如下步骤：将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列导入所述青蒿中，得到含有所述核苷酸的再生转基因青蒿。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

步骤1、根据所述核苷酸序列构建得到表达载体；

步骤2、将所述表达载体转入农杆菌，再将所述农杆菌转入青蒿中；

步骤3、通过抗生素筛选，获得含有所述核苷酸的再生转基因青蒿。

进一步地，所述核苷酸序列的制备方法包括：

根据青蒿的总RNA反转录得到cDNA，并根据所述cDNA扩增得到所述核苷酸序列。

进一步地，所述根据所述cDNA扩增得到所述核苷酸中，引物具有如SEQ ID NO.2和如SEQ ID NO.3所示的序列。

进一步地，步骤2中，根据所述核苷酸序列构建得到表达载体具体包括：

在所述核苷酸序列的5’和3’端引入BamHI和SpeI酶切位点，将pHB-GFP载体双酶切成线性化载体，并通过Infusion无缝克隆技术将所述核苷酸序列与pHB-GFP线性化载体连接，得到表达载体。

进一步地，采用冻融法将所述表达载体转入所述农杆菌中。

进一步地，将所述农杆菌转入青蒿中具体包括：将转入所述表达载体的农杆菌与所述青蒿的外植体共培养。

进一步地，所述再生转基因青蒿中腺毛密度大于等于30个每平方毫米，叶片总腺毛数量为96809个。

进一步地，所述再生转基因青蒿的青蒿素含量大于等于15mg/g DW。