[发明专利]一种提高青蒿中青蒿素含量的方法有效
| 申请号: | 202110529211.4 | 申请日: | 2021-05-14 |
| 公开(公告)号: | CN113403323B | 公开(公告)日: | 2022-06-24 |
| 发明(设计)人: | 赵静雅;何毅隆;黎凌;付雪晴;孙小芬;唐克轩 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
| 主分类号: | C12N15/29 | 分类号: | C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/14 |
| 代理公司: | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人: | 郑立 |
| 地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 提高 青蒿 青蒿素 含量 方法 | ||
1.如SEQ ID NO.1所示的核酸在提高青蒿中青蒿素含量中的应用。
2.一种提高青蒿中青蒿素含量的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:将SEQ IDNO.1所示的核酸导入所述青蒿中,得到含有所述核酸的再生转基因青蒿。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
步骤1、根据所述核酸构建得到表达载体;
步骤2、将所述表达载体转入农杆菌,再将所述农杆菌转入青蒿中;
步骤3、通过抗生素筛选,获得含有所述核酸的再生转基因青蒿。
4.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述核酸的制备方法包括:
根据青蒿的总RNA反转录得到cDNA,并根据所述cDNA扩增得到所述核酸。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述根据所述cDNA扩增得到所述核酸中,引物具有如SEQ ID NO.2和如SEQ ID NO.3所示的序列。
6.如权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤1中,根据所述核酸构建得到表达载体具体包括:
在所述核酸的5’和3’端引入BamHI和SpeI酶切位点,将pHB-GFP载体双酶切成线性化载体,并通过Infusion无缝克隆技术将所述核酸与pHB-GFP线性化载体连接,得到表达载体。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,采用冻融法将所述表达载体转入所述农杆菌中。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,将所述农杆菌转入青蒿中具体包括:将转入所述表达载体的农杆菌与所述青蒿的外植体共培养。
9.如权利要求2-8任一项所述的方法,其特征在于,所述再生转基因青蒿中腺毛密度大于等于30个每平方毫米。
10.如权利要求2-8任一项所述的方法,其特征在于,所述再生转基因青蒿的青蒿素含量大于等于15mg/g DW。
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