[发明专利]一种基于酶催化法提高侧向层析灵敏度的方法

说明书

本发明公开了一种基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法。本发明所提供的基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法是将酶联免疫和示踪标志物联合使用。本发明酶联侧向层析法是将酶联免疫用酶和检测用抗体或抗原同时吸附在示踪标志物颗粒上，检测时加入显色底物，在酶作用下，产生颜色反应，与示踪标志物自身产生的颜色叠加从而增加灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法。

背景技术

侧向层析(lateral flow test)技术以大孔径的微孔滤膜(NC膜、硝酸纤维素膜)为载体，将特异性的抗原或抗体固定在NC膜上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用侧向移动，与结合垫上的带颜色或荧光的微球标记的试剂发生特异的免疫反应，再移动到NC膜上，被固定在NC膜表面的抗原或抗体捕获，聚集在检测带上，通过聚集的光信号或荧光信号强度得到直观的显色结果，从而反应样本中待测物质的浓度。侧向层析的使用的示踪标志物可以是胶体金，乳胶微球，荧光微球等。检测原理都是依据光/荧光信号的强弱来判断待检测的浓度。因此，提高光/荧光信号的强度可以提高检测灵敏度。

侧向层析检测具有简单，快速，成本低，稳定性好，应用范围广的优点。但相比其他免疫学检测手段，具有灵敏度低的缺点。

免疫胶体金是以胶体金为示踪标志物，以抗原抗体特异性结合为分子学基础的一种免疫标记技术。胶体金为氯金酸(HAuCl₄)在还原剂作用下聚合成的带负电的胶体溶液，胶体金可通过其表面的负电荷与蛋白质上的正电荷相互作用形成复合物。因此过程中没有共价键形成，蛋白质被标记后活性不变。当该标记分子在毛细作用下与固定在试纸上的靶分子相结合时，聚集的胶体金颗粒即显色而被肉眼观察到。

酶联免疫法则是将酶偶连在抗体上，通过催化底物的颜色转变来判断实验结果的方法。相比于胶体金法，酶联免疫法具有灵敏度高的优势，但是其操作相对步骤繁琐，时间长，对样品预处理、操作人员专业能力、设备性能要求都较高。

现在技术没有将酶联免疫和侧向层析联合使用的，因为理论上，将两种方法联合使用一个潜在的缺陷是可能降低了抗体在示踪颗粒上的占位，因此灵敏度会有一定的下降。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法。

第一方面，本发明要求保护一种基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法。

本发明要求保护的基于酶催化法提高侧向层析检测灵敏度的方法，是将酶联免疫和示踪标志物联合使用。

进一步地，所述方法可包括如下步骤：在常规侧向层析检测过程中引入如下两步操作：

步骤一：在位于侧向层析试纸条的示踪标志物结合垫中的“检测物-示踪标志物”复合物与待测物结合的过程中，引入酶联免疫用酶，形成含有待测物、检测物、示踪标志物和酶联免疫用酶的复合物；

步骤二：在位于侧向层析试纸条的层析膜(如NC膜)中的检测线(T)处的捕获物与所述含有待测物、检测物、示踪标志物和酶联免疫用酶的复合物结合后，引入所述酶联免疫用酶对应的显色底物。

所述检测物为能够与所述待测物特异性结合的一种物质，所述捕获物为能够与所述检测物或所述待测物特异性结合的另一种物质(所述捕获物和所述待测物的结合位点与所述检测物与所述待测物的结合位点不同；不会破坏所述检测物与所述待测物的结合)。