[发明专利]一种提高重组蛋白表达量的方法

说明书

本发明涉及一种提高重组蛋白表达量的方法，该方法包括如下步骤：将编码FABP5蛋白的基因转入用于表达重组蛋白的细胞中，使FABP5蛋白瞬时或稳定表达；所述重组蛋白不为所述FABP5蛋白。本发明提供的方法可以显著提高重组蛋白的产量。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种提高CHO细胞蛋白表达量的方法。

背景技术

重组蛋白工业生产的常用哺乳动物作为宿主细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是最常用的宿主细胞。尽管CHO细胞已成功地用作制造宿主细胞系统超过30年，但这些细胞系在生长速度和重组蛋白生产能力方面仍然受到一定限制。改善宿主细胞的性能，提高宿主细胞的重组蛋白表达量，一直都是重组蛋白生产领域关注的重点。

通过生物分子学方法改造细胞系是常用的提高宿主细胞重组蛋白表达量的方法，现阶段应用于CHO细胞的细胞系改造方法包括：敲除、过表达特定基因以及使用非编码RNA等。这些特定基因涉及蛋白合成、细胞代谢、分泌以及细胞周期等各个细胞通路。例如，现有技术有报道通过敲除CHO细胞中的ATF6β提高了单抗的产量，通过在CHO细胞中过表达ERp57使TPO的产量提高了2.1倍，通过在CHO细胞中过表达GADD34使human AT-III的titer提高了40％，以及通过在CHO细胞中过表达MDH2，使存活细胞数目提高了1.9倍等。

脂肪酸结合蛋白(FABP)参与结合和存储疏水性配体(例如长链脂肪酸)，以及将其转运至细胞中适当的区室。脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5，FABP5)是一种细胞内结合长链脂肪酸和其他疏水性配体的小分子，在脂肪细胞和巨噬细胞中大量表达。

现有技术中暂无将FABP5作为目标基因改造用于表达重组蛋白的细胞，改善其性能的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，利用FABP5改造用于表达重组蛋白的细胞，改善其性能。

第一方面，本发明提供一种提高重组蛋白表达量的方法，所述方法包括如下步骤：将编码FABP5蛋白的基因转入用于表达重组蛋白的细胞中，进行瞬时或稳定表达；所述重组蛋白不为所述FABP5蛋白。

本发明提供的方法通过在宿主细胞中过表达FABP5蛋白，从而提升重组蛋白产量。

在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：将具有编码FABP5蛋白的基因的载体转入用于表达重组蛋白的细胞中。

在一些实施方式中，所述基因经过了密码子优化。

在一些实施方式中，所述载体中还插入了蛋白标签，如Flag标签、Halo标签、SNAP标签、His-tag标签等，优选为组氨酸(His-tag)标签。

在一些实施方式中，所述载体为真核细胞表达载体。作为本发明的优选方案，所述载体为pcDNA3.1载体，如pcDNA3.1 Hygro(+)载体。

在一些实施方式中，所述细胞为哺乳动物细胞，可以选自CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)、HEK293细胞、Vero细胞等。

在一些实施方式中，所述细胞为CHO细胞，具体可以选用CHO-K1、CHO-S、CHO-DXB11、CHO-DG44等细胞系。

在一些实施方式中，所述用于表达重组蛋白的细胞是能够稳定表达重组蛋白的单克隆细胞。

在一些实施方式中，所述用于表达重组蛋白的细胞是外源转入了重组蛋白表达载体的细胞，所述重组蛋白表达载体可以先于编码FABP5蛋白的基因或载体转入细胞，也可以与编码FABP5蛋白的基因或载体共同转入。