[发明专利]一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法

说明书

本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，属于养殖水体中污染物检测技术领域。本发明提供的检测方法采用HLB柱对水体中的金刚乙胺和美金刚进行富集净化，克服了水体中金刚乙胺和美金刚浓度低难监测的问题；同时选择金刚乙胺‑D₄作为金刚乙胺和美金刚的内标，内标法回收率在80～110％之间，具有较高的准确性。实施例的数据表明，本发明提供的检测方法对金刚乙胺和美金刚的定量限为2ng/L，对金刚乙胺和美金刚的检出限为1ng/L。

技术领域

本发明涉及养殖水体中污染物检测技术领域，尤其涉及一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法。

背景技术

随着科学技术的发展和陆地资源逐渐枯竭，沿海国家纷纷把目光投向海洋，加快了对海洋的开发和利用，海洋已成为人类食物蛋白质的重要供应场所，海水也可以淡化后再利用。同时现代养殖业日益趋向于规模化、集约化，使用抗生素、维生素、激素、金属微量元素等，对海洋环境构成了极大的威胁，简便高效的药物残留测定方法，是有效地控制药物残留发生的基础。

金刚乙胺是美金刚胺类似物，用于预防和治疗A型流感病毒感染，临床疗效优于美金刚胺，且不良反应小于美金刚胺，而美金刚胺是金刚乙胺的同分异构体，这2种美金刚胺类化合物均对动物禽流感等病毒性疾病有预防效果。经研究发现，若长期大量使用这些药物会给人类身体健康造成巨大的危害，但是，金刚乙胺和美金刚的滥用使得其在环境中的残留量越来越多。我国虽明令禁止美金刚胺等抗病毒药作为兽用药，但由于其价格低廉、效果良好，养殖户为避免病毒感染引发畜禽死亡而造成经济损失，就将美金刚胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、咪喹莫特、美金刚等抗病毒类药物掺入饲料中。将人类药物移植兽用，会造成动物中毒、药物残留、病毒抑制或变异等不良反应，同时随着养殖废水以及医药领域残留通过各种途径进入水体。含有金刚乙胺和美金刚的废水流入养殖环境，造成养殖环境的污染，最终通过在藻类、贝类、鱼类等生物体内积累，随食物链迁移而影响到人类身体健康。

当前关于金刚乙胺和美金刚的检测方法的研究较少，仅有的几种也是针对动物源性食品和饲料中药物残留量的检测，而关于养殖水体中的金刚乙胺和美金刚的检测技术更是鲜有报道。

因此，开展养殖水体中金刚乙胺和美金刚液相色谱串联质谱方法研究，建立准确性好、灵敏度高、快捷简便的检测方法尤为重要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，本发明提供的检测方法能够准确测定养殖水体中残留的金刚乙胺和美金刚的含量。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，包括以下步骤：

将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液；将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱；采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液；所述内标物为金刚乙胺-D4；

采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值；

基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度；

所述液质联用法的参数包括液相色谱参数和质谱参数；

所述液相色谱参数包括：

色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；

流动相A：甲醇；

流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；

流速：0.25mL/min；

梯度洗脱程序为：