[发明专利]一种提高红掌转化效率的方法

说明书

一种提高红掌转化效率的方法，包括通过菌液将外源基因导入红掌的受体材料的过程，所述受体材料来自于带腋芽茎段。本申请采用幼苗带腋芽茎段作为受体材料，可快速获得阳性植株，大大提高培育效率。

技术领域

本申请涉及一种提高红掌转化效率的方法。

背景技术

红掌(Anthurium andraeanum)，又称花烛，天南星科多年生常绿草本植物。茎节短，叶自基部生出，绿色，革质，全缘，长圆状心形或卵心形。叶柄细长，佛焰苞平出，革质并有蜡质光泽，橙红色或猩红色，肉穗花序黄色，可常年开花不断。原产于哥斯达黎加、哥伦比亚等热带雨林区。常附生在树上，有时附生在岩石上或直接生长在地上，性喜温暖、潮湿、半阴的环境，忌阳光直射。红掌花叶俱美，花期长、为优质的切花材料。用红色红掌为主材，配上小菊、霞草、艳山姜、变叶木瓶插，有着浓厚的江南乡惰。若以红掌为主花，篮插，配以文心兰、报岁兰、百合、天门冬，是一份精美无比的节日礼物。红掌可以吸收人体排出的废气(氨气、丙酮)，也可以吸收装修残留的各种有害气体(甲醛等)，同时可以保持空气湿润，避免人体的鼻粘膜干燥。虽然花烛有较好的观赏价值，但花色较少，在我国花卉市场的推行具有一定制约：利用传统的常规育种方式进行花色选育，具有周期长、变异不确定等问题；而利用基因工程方法对进行遗传改良，具有育种目标明确、费用低、操作简单、重复性好和育种周期短等优点。

农杆菌介导的遗传转化技术已广泛用于新品种的获得或进行种质改良的研究，但获得转基团植株与再生体系、农杆菌株类型和浸染浓度、共培养方法和时间等诸多因素有关，这些因素组成一个完整的遗传转化系统，任何一个因素的效率偏低，均会导致遗传转化效率的下降甚至无法获得转基因植株。

目前，采用红掌愈伤(管华，孔周阳，谈建中，赵川乐，李秀秀，沈成晨等，对农杆菌介导转化法获得的红掌转基因材料的抑菌处理方法，2014年第11期，154-156)、叶片和茎段(周永刚，红掌遗传转化受体系统的建立I离体高效培养体系的建立，2009年增刊，184-188)作为外植体，通过组织培养获得再生植株已获成功，由于管华等人采用红掌愈伤作为外植体的方法，是经过愈伤组织的间接器官再生方式获得再生植株的方法，是普遍用于植物遗传转化的再生方法，但该方法进行遗传转化阳性率较低；而周永刚等人采用叶片和茎段做为外植体，是通过直接器官再生方式获再生植株，使用该方法红掌转化阳性率较高。在前期，我们已利用常规的农杆菌介导遗传转化方法对红掌愈伤进行了试验，但转化阳性率较低，农杆菌污染率较高。因此，需进一步对红掌遗传转化方法进行优化，目的是建立一种红掌高效遗传转化的技术，为红掌遗传改良特别是花色和品种的改良提供技术基础。经文献检索，尚无红掌茎段遗传转化的相关报道。

发明内容

为了解决上述问题，本申请提出了一种提高红掌转化效率的方法，包括通过菌液将外源基因导入红掌的受体材料的过程，所述受体材料来自于带腋芽茎段。本申请采用幼苗带腋芽茎段作为受体材料，可快速获得阳性植株，大大提高培育效率。

优选的，所述菌液按照如下方法制备得到：用带GFP基因的植物表达载体pBI 121，通过酶切连接菊花Flavanone 3-hydroxylase基因，然后使用冻融法导入农杆菌E.coliDH5a，获得带植物表达载体pBI 121-GFP-Flavanone3-hydroxylase的农杆菌E.coli DH5a菌液。

优选的，所述受体材料按照如下方法得到：选择20-25d的无菌红掌幼苗，切取带腋芽茎段预培养为受体材料；所述预培养的时间不少于2天。

优选的，包括如下步骤：受体材料准备；菌液制备；外植体浸染；外植体共培养；转化外植体洗菌；阳性筛选及荧光检测。