[发明专利]具有提高的稳定性的哺乳动物促卵泡激素组合物

说明书

本发明涉及促性腺激素领域。具体而言，本发明提供了一种改进的包含重组人促卵泡激素和氯甲酚的组合物。这种改进的组合物在高温下具有提高的稳定性，并且可用于治疗不育症，特别是在人患者中。

技术领域

本发明涉及促性腺激素领域。具体而言，本发明提供了一种改进的包含重组人促卵泡激素和氯甲酚的组合物。这种改进的组合物在高温下具有提高的稳定性，并且可用于治疗不育症，特别是在人患者中。

背景技术

促性腺激素是一组蛋白质激素，它调节男性和女性的性腺功能，由此在人的生育能力中起重要作用。受到促性腺激素释放激素(GnRH)刺激后，它们由脊椎动物脑垂体的促性腺细胞分泌。促性腺激素是异二聚体糖蛋白，包括促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)。促性腺激素都有相同的α亚基，但包含不同的β亚基，这样确保受体结合特异性。

FSH包含92个氨基酸的α亚基和111个氨基酸的β亚基，该β亚基赋予与FSH受体的特异性结合。天然蛋白的两个亚基都被糖基化修饰。α-亚基在Asn52和Asn78天然糖基化，β-亚基则在Asn7和Asn24天然糖基化。这两个亚基都是作为前体蛋白质在细胞中产生的，然后被加工和分泌。FSH调节身体的发育、生长、青春期成熟和生殖过程。特别地，它刺激生殖细胞成熟，从而参与精子发生和卵泡发生。

卵泡发生由FSH诱导，例如通过FSH与颗粒细胞表面上的FSH受体结合。FSH受体是G蛋白偶联受体，其在FSH结合后激活偶联的G蛋白。G 蛋白反过来激活腺苷酸环化酶，导致产生第二信使分子cAMP。细胞中cAMP 浓度的增加激活了数个下游靶点，特别是cAMP依赖的蛋白激酶，然后导致黄体酮和雌二醇的合成。黄体酮和雌二醇由颗粒细胞分泌，诱导卵泡发生。颗粒细胞受到FSH刺激后，也释放形成抑制在脑垂体中产生和分泌FSH的负反馈环的抑制素-B。抑制素-B已显示出是FSH刺激卵巢的良好替代标志物。

FSH广泛用于不育症的治疗，或者单独使用或者与其他药物，尤其是与 LH联用。在本领域中，用于人治疗的通常是从绝经后人尿(尿FSH)纯化的FSH或由中国仓鼠卵巢(CHO)细胞重组产生的FSH。然而，由于存在不同的异构体，FSH制备物具有相当大的异质性。单独FSH异构体显示具有相同的氨基酸序列，但其糖基化的程度和性质不同。特别的同种型的特征在于碳水化合物分支结构的异质性和唾液酸(带负电荷的末端单糖单位)的不同掺入量，这两者都影响同种型的特定生物活性。因此，FSH的糖基化模式对其生物学活性具有显著的影响。

然而，来自不同供体和不同制备物的尿FSH在其碳水化合物结构上可以有显著差异，因而导致很大的批间差异。关于尿产品中存在的病毒也有安全顾虑。此外，从CHO细胞获得的FSH表现出这些仓鼠细胞特有的糖基化模式，该模式与人糖基化模式不同。这些差异导致了所获得的FSH以及进而要施用给患者的药物制备物的生物学活性和不良反应的差异。因此，在本领域中，重组FSH优选使用合适的哺乳动物或人细胞系产生。这样的重组 FSH包含优化的同质糖基化模式，因此当施用于患者时具有高生物活性。

为了便于方便和安全的给药，需要稳定和无菌的FSH制剂。在本领域中，使用防腐剂来避免制剂的微生物污染。然而，已知这样的防腐剂可能有害于蛋白质的稳定性，因此可能对FSH制备物具有不利影响。

在本领域中，存在使用FSH治疗不孕症的不同方法。一些方案要求每日给患者施用FSH制备物，共14天及更长时间。可以理想地使用一次以上的稳定的FSH溶液可以省去每天制备要施用的FSH制备物的要求，因此是理想的。

因此，能够获得并提供一种FSH包含优化的均质糖基化模式的FSH制备物的需求未得到满足，其中所述制备物优选具有提高的稳定性。

本发明通过提供稳定的可以使用一次以上的FSH制备物而满足了这种需求。

令人惊奇的是，本发明人发现，防腐剂氯甲酚提高了具有哺乳动物糖基化模式的FSH肽在较高温度下的稳定性。鉴于氯甲酚所属的那类防腐剂往往妨害蛋白质的稳定性，这一发现是出乎意料的，且与现有技术相反。