[发明专利]一种提高抗菌肽产量的方法

说明书

本发明属于生物制品相关技术领域，具体涉及一种提高抗菌肽产量的方法。本发明主要是通过将鲜萝卜磨碎、过滤获得提取液，向其中加入纤维素酶，促进剂，鼠尾草提取物，并进一步浓缩，过柱，干燥所得。本发明提供的方法，可以显著提高抗菌肽的产量，且浓缩后抗菌肽与纤维素酶组成融合蛋白，后续容易析出，有效降低了操作难度，为抗菌肽的获得及有效应用提供了有力保障。

技术领域

本发明属于生物制品相关技术领域，具体涉及一种提高抗菌肽产量的方法。

背景技术

抗菌肽是生物体先天免疫系统的重要组成部分，它们从广泛的生物体中分离得到，包括细菌、植物和动物。在过去的20年里，随着抗菌肽的不断被发现，抗菌肽的数量在快速的增长，它们的广谱抗菌活性也在被深入的研究。植物抗菌肽是从植物中分离得到的，与其他生命形式的抗菌肽存在许多不同点。常见的植物抗菌肽类型包括硫堇、植物防御素、橡胶蛋白、Knottins、脂转移蛋白和Snakins。由于病原微生物对抗生素的耐药性不断增强，因此迫切需要找到可以替代传统抗生素的药剂。植物抗菌肽具有广泛的生物活性，包括抗细菌、抗真菌、抗病毒、杀虫和抗癌，所以它们有希望成为治疗由病原体引起动物和人类感染的药物的候选者。植物抗菌肽发挥生物活性的机制是我们研究的重要方向，有助于找到治疗疾病的新疗法。

同时，植物抗菌肽是一类对细菌、真菌等微生物有抑制或杀灭作用的小分子多肽，它能被细菌、真菌或物理的、化学的刺激所诱导，有些抗菌肽甚至在植物体内能组成性的表达。从化学结构来看，植物抗菌肽主要包括硫堇、植物防卫素、脂转移蛋白和橡胶素类等，它们抗菌能力强，有较好的耐热性，抗菌机理独特，在农业、医药及食品等领域有着广泛的应用前景。

目前，国内外研究者大多是通过细胞培养，进一步分离所得，这种方法本身具有制备过程复杂，成本高的缺点，而且，通过细胞分离抗菌肽，并不能完全将抗菌肽成功分离出来，会造成大量的抗菌肽浪费，且最终获得的抗菌肽纯度也不高，容易导致杀菌效果降低，因此，关于如何提高抗菌肽的产量并保证其纯度仍需进一步的研究。

基于此，中国专利申请CN110105437A公开了一种分离植物抗菌肽的方法、植物抗菌肽及植物抗菌肽的用途，这种方法是通过对黑芝麻进行超声处理，并经液相色谱分离所得，虽然提高了抗菌肽的稳定性，然而，所获得的抗菌肽产量仍然不高，而且，这样提取出的抗菌肽纯度也低，影响了抗菌肽的杀菌效果。

综上所述，现有技术中普遍存在抗菌肽产量低，制备过程复杂，成本高，抗菌肽纯度低，导致杀菌效果低的缺点。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺点，本发明提供了一种提高抗菌肽产量的方法。这种方法可以显著提高抗菌肽的产量，且浓缩后抗菌肽与纤维素酶组成融合蛋白，后续容易析出，有效降低了操作难度，为抗菌肽的获得及有效应用提供了有力保障。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提高抗菌肽产量的方法，包括如下步骤：

S1、取鲜萝卜75～100g，用捣碎器捣碎，然后用纱布过滤，除去杂质，收集滤出液，得萝卜提取液；

S2、向步骤S1所得提取液中加入促进剂及鼠尾草提取物，用玻璃棒搅拌均匀，得混合物I；

S3、向步骤S2所得混合物I中加入醋酸溶液，于超声波发生仪中进行超声处理25～30min，然后用纱布过滤，收集滤出液，得提取液；

S4、将步骤S3制得的提取液于65～75℃的条件下水浴加热15～25min，然后降低至室温25℃，离心，取上清液，得混合液I；

S5、将步骤S4所得混合液I进行透析、浓缩，得反相色谱样品，经反相高效液相色谱进一步分离，即可。

优选地，步骤S2中的促进剂由蔗糖脂肪酸酯、纤维素酶、生物素按重量比1～1.5：10～13：3～5组成。