[发明专利]一种提高去甲四环素产量的方法

权利要求书

1.一种提高去甲四环素产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)斜面培养：将去甲金霉素生产菌株接种斜面培养基，25-30℃，20％-60％湿度条件下培养10-15天；

(2)诱变处理：斜面培养成熟后将孢子刮下，接种至菌丝培养基，25-30℃，20％-60％湿度条件下220rpm震荡培养4-10h，然后进行常压室温等离子体(ARTP)处理；

(3)抗性筛选：将经ARTP处理的菌悬液进行稀释、分离，稀释液涂布在含有100-1000μg/mL去甲四环素的分离培养基上，25-30℃，20％-60％湿度条件下培养10-15天，培养时第一天正置，第二天起倒置培养；

(4)菌株初筛：挑选分离培养基上的单菌落接种到斜面培养基上，25-30℃，20％-60％湿度条件下培养10-15天；斜面成熟后接种到种子培养基中，25-30℃，20％-60％湿度条件下220rpm震荡培养36-50h；种液成熟后接种到发酵培养基中，相同条件下震荡培养5-8天，生长到周期后检测效价，选效价高的菌株进行砂土保藏；

(5)菌株复试：取初筛保藏的菌株转接斜面，25-30℃，20％-60％湿度条件下培养10-15天；斜面成熟后接种到种子培养基中，25-30℃，20％-60％湿度条件下220rpm震荡培养36-50h；种液成熟后接种到发酵培养基中，相同条件下震荡培养5-8天，生长到周期后检测效价，筛选保留效价高的菌株；

(6)工艺优化：对步骤(5)筛选得到的菌株进行发酵工艺优化，进一步提高去甲四环素的发酵水平。

2.根据权利要求1所述的一种提高去甲四环素产量的方法，其特征在于，所述的步骤(2)使用的菌丝培养基成分及其含量为：葡萄糖0.3-0.8％，麦芽糖0.6-1.0％，蛋白胨0.2-0.6％，酵母粉0.2-0.6％，硫酸镁0.02-0.05％，磷酸二氢钾0.1-0.3％，磷酸氢二钾0.2-0.6％，氯化钠0.1-0.4％。

3.根据权利要求1所述的一种提高去甲四环素产量的方法，其特征在于，所述的ARTP诱变条件为：以高纯氦气作为气源，处理功率40-120W，气流量8-12SLM，等离子体发射源与样品之间的距离为2-4mm，照射时间为30-300s。

4.根据权利要求1所述的一种提高去甲四环素产量的方法，其特征在于，所述的步骤(6)的工艺条件为：

(1)斜面培养：将去甲金霉素生产菌株接种斜面培养基，25-30℃，20％-60％湿度条件下培养10-15天，所述的斜面培养基的成分及其含量为：面粉1-2％，蛋白胨0.05-0.15％，磷酸二氢钾0.01-0.1％，硫酸镁0-0.005％，琼脂2.0-2.5％；

(2)种瓶培养：斜面培养成熟后接种至种瓶培养基，25-30℃，20％-60％湿度条件下220rpm震荡培养36-50h，所述的种瓶培养基的成分及其含量为：葡萄糖1.0-3.0％，淀粉1.0-3.0％，高温豆粉1.0-3.0％，碳酸钙0.5-1.5％，酵母粉0.1-0.5％，蛋白胨0.5-3.0％，硫酸铵0.1-0.5％，溴化钠0-0.5％，磷酸二氢钾0.01-0.05％，玉米浆0-0.5％，豆油(V/V)0.5-2％，pH自然；

(3)发酵培养：种液成熟后，按照5％-10％接种量接种到发酵培养基中，25-30℃，20％-60％湿度条件下220rpm震荡培养5-8天，发酵结束，得到去甲四环素发酵液。所述的发酵培养基的成分及其含量为：淀粉5-10％，玉米粉5-10％，高温豆粉2-4％，玉米蛋白粉2-5％，碳酸钙0.5-1.5％，蛋白胨0.5-2.0％，硫酸铵0-0.5％，L-赖氨酸0.5-1.5％，溴化钠0.1-0.5％，磷酸二氢钾0.005-0.05％，玉米浆0.3-1.5％，豆油(V/V)0.5-4％，消沫剂0.01-0.05％，α-淀粉酶(淀粉用量的W/W)0.05-0.1％，2-巯基苯并噻唑0.001-0.002％。用硫酸或硝酸调节pH至5.2-5.5。

5.根据权利要求4所述的一种提高去甲四环素产量的方法，其特征在于，所述的发酵培养基的成分及其含量为：淀粉8％，玉米粉5％，高温豆粉2.5％，玉米蛋白粉2.5％，碳酸钙1％，蛋白胨1％，硫酸铵0.1％，L-赖氨酸1％，溴化钠0.3％，磷酸二氢钾0.005％，玉米浆0.3％，豆油(V/V)3％，消沫剂0.01％，α-淀粉酶(淀粉用量的W/W)0.05％，2-巯基苯并噻唑0.002％。用硫酸或硝酸调节pH至5.2-5.5。