[发明专利]一种提高膜片钳实验效率的方法有效
| 申请号： | 202010392323.5 | 申请日： | 2020-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN111748514B | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 李志远;汤凤;徐浚杰;田超;刘雨杰;黄荣奇 | 申请（专利权）人： | 广州浚远康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 胡素丽;刘明星 |
| 地址： | 510530 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 膜片 实验 效率 方法 | ||
1.一种提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：用基质胶包被细胞培养板，得到基质胶包被的细胞培养板，将细胞复苏后进行传代培养，将传代培养的细胞接种至基质胶包被的细胞培养板中培养，然后将DNA或质粒转染至细胞中，将转染后的细胞加入到玻片上培养后用于膜片钳实验；
具体步骤如下：将基质胶加入到预冷的无血清的DMEM/F12培养基中，混匀后加入到细胞培养板中孵育，得到基质胶包被的细胞培养板，将细胞复苏后接种到含有10％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养，将传代培养的细胞接种至添加有含有10％胎牛血清的DMEM培养基的基质胶包被的细胞培养板中培养，待细胞融合密度达到60％-70％时，将DNA或质粒转染至细胞中，将转染后的细胞用胰酶消化，离心收集细胞，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基重悬，将重悬后的细胞加入到玻片上培养后用于膜片钳实验；
所述的基质胶与预冷的无血清的DMEM/F12培养基的添加比为1:100～200；
所述的细胞为HEK293T细胞。
2.根据权利要求1所述的提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，所述的培养的条件为37℃、5％CO2。
3.根据权利要求1所述的提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，所述的细胞培养板为6孔细胞培养板。
4.根据权利要求1所述的提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，所述的预冷的无血清的DMEM/F12培养基为4℃预冷的无血清的DMEM/F12培养基。
5.根据权利要求1所述的提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，所述的胰酶的浓度为0.05％。
6.根据权利要求1所述的提高膜片钳实验效率的方法，其特征在于，所述的用胰酶消化，其消化条件为37℃消化2min。
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