[发明专利]一种反应专一性提高的腈水解酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202010098911.8 | 申请日： | 2020-02-18 |
| 公开（公告）号： | CN111321132B | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 郑仁朝;张焱;闻鹏飞;郑裕国 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/78 | 分类号： | C12N9/78;C12P13/02 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 韩聪 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 反应 专一性 提高 水解 突变体 及其 应用 | ||
1.一种反应专一性提高的腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQID NO.9、SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。
2.如权利要求1所述的反应专一性提高的腈水解酶突变体在催化苯乙腈合成苯乙酰胺中的应用，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5或SEQ ID NO.11所示。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括：以包含腈水解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养后获得的湿菌体或者湿菌体破碎后提取的酶作为生物催化剂，以苯乙腈为底物，以pH为7.5～8.5的缓冲液为反应介质，30～60℃、150～500r/min条件下进行转化反应，反应结束后取反应液分离纯化，获得苯乙酰胺。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，反应体系中底物的浓度为30mM，催化剂的用量以湿菌体重量计为10g/L，其中湿菌体含水质量为88-92％。
5.如权利要求1所述的反应专一性提高的腈水解酶突变体在催化苯乙腈合成苯乙酸中的应用，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10所示。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：以包含腈水解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养后获得的湿菌体或者湿菌体破碎后提取的酶作为生物催化剂，以苯乙腈为底物，以pH为7.5～8.5的缓冲液为反应介质，30～60℃、150～500r/min条件下进行转化反应，反应结束后取反应液分离纯化，获得苯乙酸。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，反应体系中底物的浓度为30mM，催化剂的用量以湿菌体重量计为10g/L，其中湿菌体含水质量为88-92％。
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