[发明专利]一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺

说明书

本发明公开了一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；S2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；S3：对层析前溶液进行层析。本工艺能够将静注人免疫球蛋白溶液中IgA含量控制在国家要求范围内，节约成本，提高去除人免疫球蛋白中IgA载量。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺。

背景技术

人免疫球蛋白，是取健康献血员的新鲜血浆或保存期不超过2年的冰冻血浆，每批最少应由1000名以上健康献血员的血浆混合。用低温乙醇蛋白分离法分段沉淀提取免疫球蛋白组分，经超滤或冷冻干燥脱醇、浓缩和灭活病毒处理等工序制得，其免疫球蛋白纯度应不低于90％。然后配制成蛋白浓度为10％的溶液，加适量稳定剂，除菌滤过，无菌灌装制成。

静注人免疫球蛋白的活性成分为人免疫球蛋白，以1000人份以上的健康人血浆为原料，分离制备得到IgG免疫球蛋白。静注人免疫球蛋白含有广谱抗病毒、细菌或其它病原体的IgG抗体，另外免疫球蛋白的独特型和独特型抗体能形成复杂的免疫网络，所以具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用，临床上主要用于原发性免疫球蛋白缺乏症、继发性免疫球蛋白缺陷病、自身免疫性疾病。

提取人免疫球蛋白的技术主要是低温乙醇法，低温乙醇法始于20世纪40年代。但是低温乙醇分离蛋白质的方法制得的免疫球蛋白不能用于静脉注射，否则会引起严重的副反应，这是因为，除了体内缺乏IgG外，另外一个重要的原因是制剂中存在着与IgG聚合体相关的抗补体活性。为了治疗像原发性免疫缺陷、免疫性血小板缺乏性紫癜和皮肤黏膜淋巴结综合征等需要注射大剂量的免疫球蛋白的疾病，人们的研究重点放在如何减少抗补体活性上。主要的方法包括酶解法和化学修饰法，在消除和减少抗补体活性的同时，也影响到了IgG的全活性表达。如IgG上Fc段的功能与效应。经过多次的改进，现在的制备技术主要有低温乙醇法结合层析法。低温乙醇法以人血浆为原料，一般经过二次沉淀，得到免疫球蛋白的二次沉淀组分，二次沉淀组分中包括大部分的IgG、少量的IgA、IgM、还带有多聚体和PKA。

免疫球蛋白中主要富含单体和二聚体的IgG，同时也含有如IgA、IgM等微量其它球蛋白，含有这些微量球蛋白的产品在使用时，会产生不良反应，例如，临床上IgA缺乏症患者在使用含有IgA的产品会产生不良反应，严重者甚至威胁生命。

离子交换层析是一种在生物制药行业广泛应用的纯化方法，主要是根据各种蛋白分子的表面净电荷差异，通过调整pH值和电导率来分离纯化蛋白质。在层析工艺中，溶液的蛋白含量和层析介质的载量是影响层析工艺时间和规模的重要因素。现有很多厂家采用层析的技术去除免疫球蛋白中的IgA，但是载量太低，成本太高，如何在提高载量的同时，又能达到去除IgA的效果是技术难点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，既能够有效地去除IgA，又能提高IgA载量。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：

一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：

S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；

S2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；

S3：对层析前溶液进行层析。

其中，步骤S1具体如下：

P1：用相当于二次沉淀组分体积5～10倍的注射用水溶解二次沉淀组分，并在2～8℃下搅拌2～4小时得到溶解液；