[发明专利]一种提高基因工程菌泛酸产量的构建方法及菌株

权利要求书

1.一种高产泛酸的基因工程菌，由如下方法构建获得：

(1)以菌株CCTCC NO：M 2018914为底盘菌株，将其基因组中的lpd基因的启动子替换为Trc启动子，得到DPA9 Trc-lpd，记为DPA10；

(2)将DPA9 Trc-lpd基因组中的glk基因敲除，得到DPA9 Trc-lpd/△glk，记为DPA11；

(3)将DPA9 Trc-lpd/△glk基因组中galP基因敲除，得到DPA9 Trc-lpd/△glk/△galP，记为DPA12；

(4)将DPA9 Trc-lpd/△glk/△galP基因组中的pykA基因的启动子替换为Trc启动子，得到DPA9 Trc-lpd/△glk/△galP/Trc-pykA，记为DPA13；

(5)将DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA基因组中的pykF基因的启动子替换为Trc启动子，得到DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykF，记为DPA14；

(6)将DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykF基因组中的ptsG基因的启动子替换为Trc启动子，得到DPA9 Trc-lpd/△glk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykA/Trc-ptsGpykF/Trc-ptsG，记为DPA15；

(7)将DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykF/Trc-ptsG基因组中的yfbQ基因敲除，得到DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykA/Trc-ptsG pykF/Trc-ptsG/ΔyfbQ，记为DPA16；

(8)将DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykF/Trc-ptsG/ΔyfbQ基因组中的ppsA基因敲除，得到DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykA/Trc-ptsG pykF/Trc-ptsG/ΔyfbQ/△ppsA，记为DPA17；

(9)将DPA9 Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykF/Trc-ptsG/ΔyfbQ/ΔppsA基因组中的poxB、pflB、ldhA基因依次敲除，得到新的基因工程菌株DPA9Trc-lpd/Δglk/ΔgalP/Trc-pykA/Trc-pykA/Trc-ptsG pykF/Trc-ptsG/△yfbQ/△ppsA/△poxB/△pflB/△ldhA，记为DPA20；

(10)将DPA9 Trc-lpd/△glk/△galP/Trc-pykA/Trc-pykF/Trc-ptsG/△yfbQ/△ppsA/△poxB/△pflB/△ldhA基因组中的ilvE基因敲除，得到新的基因工程菌株DPA9Trc-lpd/△glk/△galP/Trc-pykA/Trc-pykA/Trc-ptsG pykF/Trc-ptsG/△yfbQ/ΔppsA/ΔpoxB/ΔpflB/ΔldhA/ΔilvE，记为DPA21；

(11)在质粒pTrc99a-panBC(CG)上增加来自枯草芽孢杆菌的alsS基因,得到新的质粒pTrc99a-panBC(CG)-alsS(BS)，记为pBCS；

(12)在质粒pTrc99a-panBC(CG)-alsS(BS)上增加来自Streptococcus intermediusB196的panT基因得到新的质粒pTrc99a-panBC(CG)-alsS(BS)-panT，记为pBCST；

(13)将步骤(12)构建好的质粒pBCST导入步骤(10)获得的菌株DPA21中，得到菌株DPA21/pBCST，即为所述高产泛酸的基因工程菌。

2.如权利要求1所述的高产泛酸的基因工程菌，其特征在于所述菌株为大肠杆菌W3110DPA21/pBCST(Escherichia coli W3110 DPA21/pBCST)，保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，保藏日期：2019年12月9日，保藏编号：CCTCC NO：M 20191027。