[发明专利]一种提高CRISPR/Cas9介导的同源修复效率的方法有效
| 申请号： | 201910277216.5 | 申请日： | 2019-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN111793606B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 连正兴;李岩;邓守龙;刘国世;连玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/90;C12N15/85;C12N15/12 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 crispr cas9 同源 修复 效率 方法 | ||
1.p53蛋白小分子激动剂在绵羊成纤维细胞基因编辑中的应用，其特征在于，将p53蛋白小分子激动剂添加至转染后培养基因编辑细胞的细胞培养液中；
所述基因编辑为通过同源修复实现的基因编辑；
所述p53蛋白小分子激动剂为CTX1或Nutlin-3，或者为选自RITA、CTX1、Nutlin-3中任意两种的组合；
在所述转染后培养基因编辑细胞的细胞培养液中，所述RITA的浓度为2～15nM；所述CTX1的浓度为0.2～1.5μM；所述Nutlin-3的浓度为0.5～10μM。
2.一种提高绵羊成纤维细胞基因编辑同源修复效率的方法，其特征在于，将待导入核酸转染至绵羊成纤维细胞后，采用包含p53蛋白小分子激动剂的细胞培养液培养转染后的细胞；
所述p53蛋白小分子激动剂为CTX1或Nutlin-3，或者为选自RITA、CTX1、Nutlin-3中任意两种的组合；
在所述细胞培养液中，所述RITA的浓度为2～15nM；所述CTX1的浓度为0.2～1.5μM；所述Nutlin-3的浓度为0.5～10μM。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞培养液还包含基础培养液，所述基础培养液包含细胞生长所需的碳水化合物、氨基酸、维生素和无机盐离子。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)待转染的绵羊成纤维细胞和待导入核酸的制备；
(2)待导入核酸与待转染的绵羊成纤维细胞混合后进行转染；
(3)采用包含p53蛋白小分子激动剂的细胞培养液培养转染后的绵羊成纤维细胞；
(4)筛选细胞，得到基因编辑阳性细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述培养为在37℃培养24～72h。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养为在37℃培养48h。
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