[发明专利]一种提高肉糜中肌原纤维蛋白特性的方法

权利要求书

1.一种提高肉糜中肌原纤维蛋白特性的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将肉糜分成五组，肉糜是由下列重量份配比的原料配制而成：瘦肉1480-1520份、肥肉460-500份、冰水395-420份、食盐20-30份；分别称为A肉糜、B肉糜、C肉糜、D肉糜与E肉糜，在P₁压强环境下将A肉糜置于10℃水浴中水浴2min，得到A₁肉糜，将B肉糜、C肉糜、D肉糜与E肉糜分别置于10℃高压腔体中并分别于P₂、P₃、P₄与P₅压强下高压处理2min，进而分别得到B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜与E₁肉糜；

其中，P1为0.1MPa，P2为100MPa，P3为200MPa，P4为300MPa，P5为400MPa；

（2）将磷酸缓冲液分别加入步骤（1）中的A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜与E₁肉糜中并分别搅拌混匀，然后分别进行离心处理，

A₁肉糜离心处理后得到上层的A乳化层、中层的A肌肉蛋白质溶液层与下层的A沉淀物层，并收集A肌肉蛋白质溶液层；

B₁肉糜离心处理后得到上层的B乳化层、中层的B肌肉蛋白质溶液层与下层的B沉淀物层，并收集B肌肉蛋白质溶液层；

C₁肉糜离心处理后得到上层的C乳化层、中层的C肌肉蛋白质溶液层与下层的C沉淀物层，并收集C肌肉蛋白质溶液层；

D₁肉糜离心处理后得到上层的D乳化层、中层的D肌肉蛋白质溶液层与下层的D沉淀物层，并收集D肌肉蛋白质溶液层；

E₁肉糜离心处理后得到上层的E乳化层、中层的E肌肉蛋白质溶液层与下层的E沉淀物层，并收集E肌肉蛋白质溶液层；

其中，加入A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜与E₁肉糜中的磷酸缓冲液的摩尔浓度和pH值均相等，磷酸缓冲液的摩尔浓度为0.2mol·L^-1，磷酸缓冲液的pH值为6.5；且A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜以及E₁肉糜与磷酸缓冲液的混合份数比例均为1:2.8-1:3.2，其中A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜与E₁肉糜的份数均为重量份，且A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜与E₁肉糜的单位均为g，磷酸缓冲液的份数为体积份数，且磷酸缓冲液的单位为mL，并且搅拌的时间为54-66s；并且A₁肉糜、B₁肉糜、C₁肉糜、D₁肉糜以及E₁肉糜进行离心处理的条件均为：离心力10000×g，离心时间17-23min；

（3）将第一标准盐溶液分别加入步骤（2）中的A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层与E肌肉蛋白质溶液层中并分别搅拌混匀，然后分别进行离心处理，

A肌肉蛋白质溶液层离心处理后得到一级A上清液与一级A沉淀，并收集一级A沉淀；

B肌肉蛋白质溶液层离心处理后得到一级B上清液与一级B沉淀，并收集一级B沉淀；

C肌肉蛋白质溶液层离心处理后得到一级C上清液与一级C沉淀, 并收集一级C沉淀；

D肌肉蛋白质溶液层离心处理后得到一级D上清液与一级D沉淀，并收集一级D沉淀；

E肌肉蛋白质溶液层离心处理后得到一级E上清液与一级E沉淀, 并收集一级E沉淀；

其中，加入A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层与E肌肉蛋白质溶液层中的第一标准盐溶液的组分、各组分摩尔浓度以及pH值均相同，第一标准盐溶液中各组分对应的摩尔浓度分别为：KCl 100mmol·L^-1， K₂HPO₄/KH₂PO₄ 20mmol·L^-1，MgCl₂ 2mmol·L^-1，EGTA 1mmol·L^-1，且第一标准盐溶液的pH值为7.0；

且A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层以及E肌肉蛋白质溶液层与第一标准盐溶液的混合份数比例均为1:3.8-1:4.2，其中A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层与E肌肉蛋白质溶液层的份数均为重量份，A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层与E肌肉蛋白质溶液层的单位均为g，第一标准盐溶液的份数为体积份数，且第一标准盐溶液的单位为mL；

并且A肌肉蛋白质溶液层、B肌肉蛋白质溶液层、C肌肉蛋白质溶液层、D肌肉蛋白质溶液层以及E肌肉蛋白质溶液层进行离心处理的条件均为：离心力2000×g，离心时间8-12min，离心温度4℃；

（4）将第一标准盐溶液分别加入步骤（3）中的一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀与一级E沉淀中分别搅拌混匀，然后分别进行离心处理，

一级A沉淀离心处理后得到二级A上清液与二级A沉淀，并收集二级A沉淀；

一级B沉淀离心处理后得到二级B上清液与二级B沉淀，并收集二级B沉淀；

一级C沉淀离心处理后得到二级C上清液与二级C沉淀, 并收集二级C沉淀；

一级D沉淀离心处理后得到二级D上清液与二级D沉淀，并收集二级D沉淀；

一级E沉淀离心处理后得到二级E上清液与二级E沉淀, 并收集二级E沉淀；

其中，加入一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀与一级E沉淀中的第一标准盐溶液的组分、各组分摩尔浓度以及pH值均相同，且一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀以及一级E沉淀与第一标准盐溶液的混合份数比例均为1:3.8-1:4.2，其中一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀与一级E沉淀的份数均为重量份，且一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀与一级E沉淀的单位均为g，第一标准盐溶液的份数为体积份数，且第一标准盐溶液的单位为mL；并且一级A沉淀、一级B沉淀、一级C沉淀、一级D沉淀以及一级E沉淀进行离心处理的条件均为：离心力2000×g，离心时间8-12min，离心温度4℃；

（5）二级A沉淀、二级B沉淀、二级C沉淀、二级D沉淀与二级E沉淀分别经过步骤（4）处理后，进而分别得到三级A沉淀、三级B沉淀、三级C沉淀、三级D沉淀与三级E沉淀，依此类推，重复步骤（4）多次，进而分别得到N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀与N级E沉淀；

（6）将第二标准盐溶液分别加入步骤（5）中的N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀与N级E沉淀中并分别搅拌相同时间，然后分别用纱布过滤一次，进而分别得到N+1级A沉淀、N+1级B沉淀、N+1级C沉淀、N+1级D沉淀与N+1级E沉淀，再分别对N+1级A沉淀、N+1级B沉淀、N+1级C沉淀、N+1级D沉淀与N+1级E沉淀进行离心处理，

N+1级A沉淀离心处理后得到N+2级A上清液与N+2级A沉淀，并收集N+2级A沉淀；

N+1级B沉淀离心处理后得到N+2级B上清液与N+2级B沉淀，并收集N+2级B沉淀；

N+1级C沉淀离心处理后得到N+2级C上清液与N+2级C沉淀，并收集N+2级C沉淀；

N+1级D沉淀离心处理后得到N+2级D上清液与N+2级D沉淀，并收集N+2级D沉淀；

N+1级E沉淀离心处理后得到N+2级E上清液与N+2级E沉淀，并收集N+2级E沉淀；

其中，加入N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀与N级E沉淀中的第二标准盐溶液的组分、各组分摩尔浓度和pH值均相同，第二标准盐溶液中各组分对应的摩尔浓度分别为：KCl 100mmol·L^-1， K₂HPO₄/ KH₂PO₄ 20mmol·L^-1，MgCl₂ 2mmol·L^-1，EGTA 1mmol·L^-1，且第二标准盐溶液中还含有1%的Triton X-100，即100mL第二标准盐溶液中含有1g 的TritonX-100；

且N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀以及N级E沉淀与第二标准盐溶液的混合份数比例均为1:3.8-1:4.2，其中N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀与N级E沉淀的份数均为重量份，且N级A沉淀、N级B沉淀、N级C沉淀、N级D沉淀与N级E沉淀的单位均为g，第二标准盐溶液的份数为体积份数，且第二标准盐溶液的单位为mL；

并且N+1级A沉淀、N+1级B沉淀、N+1级C沉淀、N+1级D沉淀以及N+1级E沉淀进行离心处理的条件均为：离心力2000×g，离心时间8-12min，离心温度4℃；

（7）将NaCl溶液分别加入步骤（6）中的N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀与N+2级E沉淀中并分别搅拌混匀，然后分别进行离心处理，

N+2级A沉淀离心处理后得到终级A上清液与终级A沉淀，并收集终级A沉淀，得到纯化的A肌原纤维蛋白质；

N+2级B沉淀离心处理后得到终级B上清液与终级B沉淀，并收集终级B沉淀，得到纯化的B肌原纤维蛋白质；

N+2级C沉淀离心处理后得到终级C上清液与终级C沉淀，并收集终级C沉淀，得到纯化的C肌原纤维蛋白质；

N+2级D沉淀离心处理后得到终级D上清液与终级D沉淀，并收集终级D沉淀，得到纯化的D肌原纤维蛋白质；

N+2级E沉淀离心处理后得到终级E上清液与终级E沉淀，并收集终级E沉淀，得到纯化的E肌原纤维蛋白质；

其中，加入N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀与N+2级E沉淀中的NaCl溶液的摩尔浓度均为0.1mol·L^-1；

且N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀以及N+2级E沉淀与NaCl溶液的混合混合份数比例均为1:3.8-1:4.2，其中N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀与N+2级E沉淀的份数均为重量份，且N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀与N+2级E沉淀的单位均为g，NaCl溶液的份数为体积份数，且NaCl溶液的单位为mL；

并且N+2级A沉淀、N+2级B沉淀、N+2级C沉淀、N+2级D沉淀以及N+2级E沉淀进行离心处理的条件均为：离心力2000×g，离心时间8-12min，离心温度4℃；

（8）用双缩脲法分别测定A肌原纤维蛋白质、B肌原纤维蛋白质、C肌原纤维蛋白质、D肌原纤维蛋白质与E肌原纤维蛋白质的浓度，并分别用磷酸盐缓冲液将A肌原纤维蛋白质、B肌原纤维蛋白质、C肌原纤维蛋白质、D肌原纤维蛋白质与E肌原纤维蛋白质的浓度均调至5mg·mL^-1，进而分别得到A标准肌原纤维蛋白质、B标准肌原纤维蛋白质、C标准肌原纤维蛋白质、D标准肌原纤维蛋白质与E标准肌原纤维蛋白质，然后分别将A标准肌原纤维蛋白质、B标准肌原纤维蛋白质、C标准肌原纤维蛋白质、D标准肌原纤维蛋白质与E标准肌原纤维蛋白质置于4℃冷库中保存备用；

其中磷酸盐缓冲液为50mmol·L^-1的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄，且磷酸盐缓冲液的pH值为6.5。