[发明专利]一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法

权利要求书

1.一种提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0.03-0.05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0.6-1.0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6.8；

当发酵液的OD660nm大于或等于25时，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3。

2.根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述混合液的体积与发酵液的体积比为1:100。

3.根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基原料包括：

葡萄糖0.54％，硫酸铵0.35％，磷酸二氢钾1.0％，硫酸镁0.26％，稳定剂0.46％，消泡剂0.05％，氧化钙0.0046％和微量元素0.18％；

所述微量元素为七水硫酸铁5.00g/L、硼酸0.10g/L、一水硫酸锰0.10g/L、七水硫酸锌3.80g/L、二水钼酸钠0.10g/L和硫酸钴0.10g/L的混合液。

4.根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液的制备方法为：

配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0.03-0.05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比1.0-1.2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至6.4～6.5，种子液的OD_660nm大于或等于1时视为种子成熟。

5.根据权利要求4所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述种子培养基原料包括：

葡萄糖1.0％、硫酸铵0.18％、磷酸二氢钾0.9％、硫酸镁0.25％、稳定剂0.36％和消泡剂0.1％。

6.根据权利要求3或5所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，所述稳定剂为一水柠檬酸，所述消泡剂为有机硅。

7.根据权利要求1所述的提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

配制种子培养基，控制温度36-38℃，罐压0.03-0.05Mpa，搅拌转速300-400rpm，通气比1.0-1.2v/v/m，接入产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌进行培养，培养周期为9～12h，pH下降至6.4～6.5，种子液的OD_660nm大于或等于1时视为种子成熟；

将成熟的N-乙酰氨基葡萄糖种子液按照12～15％接种量接种到含有发酵培养基的发酵罐中培养，控制发酵温度36-38℃，罐压0.03-0.05Mpa，搅拌转速250-450rpm，通气比0.6-1.0v/v/m，溶氧25％～27％，pH＝6.8；

所述发酵培养基原料包括：葡萄糖0.54％，硫酸铵0.35％，磷酸二氢钾1.0％，硫酸镁0.26％，稳定剂0.46％，消泡剂0.05％，氧化钙0.0046％和微量元素0.18％；

所述微量元素为七水硫酸铁5.00g/L、硼酸0.10g/L、一水硫酸锰0.10g/L、七水硫酸锌3.80g/L、二水钼酸钠0.10g/L和硫酸钴0.10g/L的混合液；

当0.54％的葡萄糖耗至0.05％～0.06％时开始流加质量浓度为75％的葡萄糖，使培养过程中的残糖维持在0.01-0.08％；

当发酵液的OD_660nm大于或等于25时，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L-天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L-天门冬氨酸的质量比为25:3，所述混合液的体积与发酵液的体积比为1:100。