[发明专利]一种梯度pH法制备胸苷的方法

权利要求书

1.一种梯度pH法制备胸苷的方法，其特征在于，以DNA水解液为底物与胸腺嘧啶混合，以固定化大肠杆菌细胞为催化剂反应制备胸苷，包括以下步骤制备胸苷：将DNA水解液和胸腺嘧啶混合，在反应前期加入磷酸盐缓冲溶液并调节体系pH值为5.0~6.0，加入固定化大肠杆菌细胞，在此弱酸性体系下于50~70℃反应2.0~2.5 h，反应后期调节体系pH值为7.5~8.5，在此弱碱性体系下反应1.5~2.0h，反应结束；将反应液置于4℃冰箱2～5d，过滤，弃去滤渣，加入活性炭脱色，过滤得到透明液体，减压蒸干，得到微黄色固体粉末；然后用硅胶柱进行等度洗脱分离，制得白色晶体胸苷；

所述固定化大肠杆菌细胞采用包埋-交联法以PVA和卡拉胶为包埋有机材料、活性炭为添加剂、饱和硼酸和KCI溶液为固定剂溶液制得，具体为：

①将PVA浸泡在水中，加入卡拉胶，加热使两者充分溶解并灭菌，得到混合溶液并待用；

②将大肠杆菌种子接种于液体培养基中，依次经过培养、离心、洗涤和再次离心，得到大肠杆菌细胞；

③将步骤②的大肠杆菌细胞和灭菌活性炭加入到步骤①中的混合溶液中，混匀后，滴加灭菌固定剂溶液进行成型，得到固定化大肠杆菌细胞；

所述混合溶液中PVA、卡拉胶、水的质量比为3:0.3:50；所述大肠杆菌细胞和活性炭的质量比为5:1，大肠杆菌细胞在所述混合溶液中的质量浓度为1g/L。

2.根据权利要求1所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法，其特征在于，所述DNA水解液在磷酸盐缓冲溶液中的浓度为30~100 mmol/L，固定化大肠杆菌细胞的质量浓度为80~200g/L，胸腺嘧啶浓度为DNA水解液浓度的3倍。

3.根据权利要求2所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.0。

4.根据权利要求1所述的一种梯度pH法制备胸苷的方法，其特征在于，所述固定剂溶液为KCl-饱和硼酸溶液，其中KCl的质量分数为4%。