[发明专利]一种苯乙醇苷含量提高的转基因植株及生产方法

说明书

本发明公开了一种苯乙醇苷含量提高的转基因植株及生产方法，属于生物技术领域。所述转基因植株中转入的基因包括RgPAL1基因和RgTyrDC基因，转基因植株包括红花钓钟柳，生产方法如下：1)制备含RgPAL1和RgTyrDC基因的植物表达载体；2)将植物表达载体转化工程菌，将得到的菌株共转化植株；3)验证转基因植株，测定苯乙醇总苷，筛选苯乙醇总苷含量提高的转基因植株。本发明的转基因植株中苯乙醇总苷含量是非转化植株的约1.6倍，三种苯乙醇苷(毛蕊花糖苷、松果菊苷、金石蚕苷)含量也分别提高了约1.85倍，1.41倍和1.40倍，极大提高了苯乙醇苷的含量，利于推广。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地涉及一种苯乙醇苷含量提高的转基因植株及生产方法。

背景技术

苯乙醇苷通常是以β-葡萄糖为母核，分别与苯丙烯酸酯化、与α 羟基苯乙基苷化；中心葡萄糖基上常连有乙酰基、咖啡酰基、阿魏酰基、香豆酰基、桂皮酰基、香草酰基或鼠李糖、阿拉伯糖、芹糖、葡萄糖等糖基的一系列化合物，包括红景天苷（salidroside）、毛蕊花糖苷（acteoside）、松果菊苷（echinacoside）、金石蚕苷（poliumoside）、连翘酯苷（forsythiaside）、米团花苷（leucosceptoside）、角胡麻苷（martynoside）等200余种，具有抗氧化、抗衰老、保肝、免疫调节、神经保护等作用。

由于苯乙醇苷具有多种良好的生物学活性，为获得富含苯乙醇苷的食材或药材，人们广泛开展了前体饲喂的研究。Liu等（Liu, Guo et al., Improved accumulation ofphenylethanoid glycosides by precursor feeding to suspension culture ofCistanche salsa. Biochem. Eng. J., 2007, 33, 88-93）通过给盐生肉苁蓉Cistanchesalsa的悬浮细胞外源添加酪氨酸、苯丙氨酸、咖啡酸、黄瓜汁，可增加苯乙醇苷的积累量；Hu 等（Hu, Jia et al., Effects of feeding tyrosine and phenylalanine on theaccumulation of phenylethanoid glycosides to Cistanche deserticola cellsuspension culture. Chin. J. Nat. Med., 2014, 12(5), 0367-0372）和Cheng等（Cheng, Wei et al., Cistanche deserticola cell suspension cultures:Phenylethanoid glycosides biosynthesis and antioxidant activity. ProcessBiochem., 2005, 40, 3119-3124）分别给肉苁蓉Cistanche deserticola外源饲喂酪氨酸、苯丙氨酸、椰子汁、酪蛋白水解物和脯氨酸，也可不同程度提高苯乙醇苷的积累量；闫（闫小慧，狭叶松果菊组织培养、毛状根诱导及其松果菊苷和绿原酸积累的研究[D] 重庆，西南大学，2007）发现在狭叶松果菊Echinacea angustifolia根悬浮培养基中外源添加苯丙氨酸，亦有利于苯乙醇苷的积累。王等（王丰青，索艳飞等，一种利用地黄毛状根生产毛蕊花糖苷的方法，CN201610554590.1）发现经水杨酸处理地黄毛状根能够在短时间内提高毛蕊花糖苷生物合成关键基因的表达从而完成毛蕊花糖苷的积累。