[发明专利]一种提高非整合减毒李斯特菌外源抗原蛋白表达的方法

权利要求书

1.一种表达非整合减毒李斯特菌外源抗原蛋白的方法，其包括以下步骤：

(1) 将重组核酸分子插入质粒或表达载体中，构建重组质粒或重组表达载体；

(2) 将所述重组质粒或重组表达载体转染至李斯特菌中，利用所述重组质粒或重组表达载体表达所述外源抗原蛋白；

其中，所述重组核酸分子包含编码重组多肽的开放阅读框，所述重组多肽包含融合至衍生李斯特菌溶血素LLO多肽的异源性抗原和蛋白连接肽，所述重组的核酸分子还包含第一启动子序列；其中，所述衍生李斯特菌溶血素LLO多肽选自：如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；

所述异源性抗原替换如SEQ ID NO:4所示的衍生李斯特菌溶血素LLO多肽的第533位至第534位氨基酸序列；

所述异源性抗原的两端均连接有蛋白连接肽，所述蛋白连接肽由基本柔性单元组成，所述蛋白连接肽中所述基本柔性单元的数量为1、3或4个；

所述李斯特菌为非整合型李斯特菌Lm 10403SΔactA，Lm 10403SΔactA是Lm 10403S中缺失actA基因的减毒李斯特菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述异源性抗原选自肿瘤抗原或非肿瘤抗原。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述非肿瘤抗原选自OVA或具有OVA功能的片段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，编码所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基本柔性单元为GGGGS。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一启动子序列选自编码Phly基因的序列。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述重组核酸分子还包含用于检测的标签序列或编码代谢产物的基因。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述代谢产物选自次级代谢产物。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法得到的外源抗原蛋白。

11.根据权利要求10所述的外源抗原蛋白或包含所述外源抗原蛋白的组合物在制备用于杀死细胞的药物中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其中，所述细胞选自肿瘤细胞。

13.根据权利要求12所述的应用，其中，所述肿瘤细胞选自癌细胞。