[发明专利]一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法有效
| 申请号： | 201811384656.2 | 申请日： | 2018-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN109266635B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 徐书琴;张恒维;席毓淋;张显;饶志明;杨套伟;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/82 | 分类号： | C12N9/82;C12N15/55;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 天冬 酰胺酶 突变体 及其 构建 方法 | ||
1.一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述酶突变体是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-天冬酰胺酶的第22位谷氨酸突变为赖氨酸得到的。
2.如权利要求1所述的一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述L-天冬酰胺酶的来源为嗜热嗜压古菌
3.编码权利要求1或2所述的一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的重组表达载体。
5.一种表达权利要求1或2所述L-天冬酰胺酶突变体的基因工程菌。
6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以枯草芽孢杆菌
7.一种制备权利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，是在SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的基础上，将编码第22位的谷氨酸的密码子突变成编码赖氨酸的密码子，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到枯草芽孢杆菌宿主菌中即得到枯草芽孢杆菌基因工程菌。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法具体是:（1）以SEQ ID NO.2所示核苷酸序列为模板，以序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物，进行PCR，得到编码第22位谷氨酸突变成赖氨酸的E22K突变体基因序列；(2)将步骤（1）得到的重组基因序列，连接到pMA5表达载体中，得到重组质粒pMA5-E22K，重组质粒化转化到枯草芽孢杆菌宿主中，获得重组枯草芽孢杆菌基因工程菌。
9.权利要求1或2所述一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体在食品行业的应用。
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