[发明专利]一种连续体积梯度毛细管数字PCR装置及其使用方法有效
申请号: | 201811248584.9 | 申请日: | 2018-10-24 |
公开(公告)号: | CN109355178B | 公开(公告)日: | 2022-04-26 |
发明(设计)人: | 李孝锦 | 申请(专利权)人: | 四川大学华西医院 |
主分类号: | C12M1/38 | 分类号: | C12M1/38;C12M1/00 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡;张娟 |
地址: | 610041 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 连续 体积 梯度 毛细管 数字 pcr 装置 及其 使用方法 | ||
1.一种毛细管在数字PCR中的用途,其特征在于,所述毛细管内径由大到小连续变化,且所述毛细管按照如下方法制备而成:将内径为1mm毛细管在酒精灯烧烤下,均匀用力拉制毛细管至断裂,得到粗端内径1mm、细端内径20μm、长3cm的毛细管。
2.一种连续体积梯度毛细管数字PCR装置,其特征在于,该装置包括:
一个可编程热循环仪;
毛细管,所述毛细管内径由大到小连续变化,且所述毛细管按照如下方法制备而成:将内径为1mm毛细管在酒精灯烧烤下,均匀用力拉制毛细管至断裂,得到粗端内径1mm、细端内径20μm、长3cm的毛细管;
一个荧光信号采集设备。
3.如权利要求2所述的装置,其特征在于,所述可编程热循环仪是PCR仪;和/或,所述荧光信号采集设备是荧光显微镜。
4.权利要求3所述装置的使用方法,其特征在于,包含以下步骤:
(1)将含荧光基团的PCR反应体系和与水等密度油相按照1:(2~4)的比例震荡混匀,置入内径由大到小连续变化的毛细管中,封闭毛细管两端;
(2)加热使油相和水相沿毛细管径向交替分布;
(3)进行PCR反应,荧光信号采集设备下统计阳性微滴占比30%~50%区域的微滴数和微滴半径,计算PCR模板拷贝数。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(2)加热条件为,95℃下维持10min。
6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述PCR反应体系和与水等密度油相的比例是1:3(v/v)。
7.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述油相为蓖麻油与石蜡油按3:1(v/v)比例混合,再用该混合物配制胆固醇饱和溶液,即得。
8.如权利要求4或7所述的方法,其特征在于,所述油相还含有表面活性剂。
9.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述PCR反应体系的荧光基团位于探针上,或者位于双链荧光染料分子上。
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