[发明专利]提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及小鼠受精方法。当前小鼠体外受精的囊胚率较低，不利于依托小鼠胚胎的辅助生殖技术研究的展开。本发明提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒，包括a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重组蛋白和d微克的DPEP2重组蛋白。a:b:c:d＝2:20:1:2。ERO1L重组蛋白为内质网氧化还原酶1类似蛋白，在DNA序列数据库中的基因ID为50527。DPEP2重组蛋白为二肽酶‑2，在DNA序列数据库中的基因ID为319446。本发明在试剂盒中加入ERO1L重组蛋白和DPEP2重组蛋白，使得本发明能够显著提升精子活力和囊胚率。

技术领域

本发明属于培养试剂盒技术领域，具体涉及一种提高小鼠精子活力及囊胚率的体外培养试剂盒及其使用方法。

背景技术

受精是精子与卵子相互结合而形成受精卵(合子)的过程，它标志着新生命的开端。在此过程中，精子和卵子携带者分别来自父本和母本的遗传物质，精子和卵子的质量决定着早期胚胎发育的成败。目前，对于受精这一神秘的生物学事件的认知大多来自体外受精的研究。然而，迄今为止，人类对受精的认识尚未穷尽，还需要倚重体外受精技术来进一步研究受精机制。

小鼠模型是目前体外受精研究的重要手段，因此，受精科学研究需要使用、消耗大量的小鼠胚胎。然而，根据研究表明，现有小鼠胚胎的培养过程中，约有10％～25％的卵细胞由于受精失败或是早期胚胎发育异常而被丢弃。传统的用于小鼠体外受精的培养液主要是HTF液。上述培养液可以为精子提供了一个缓冲和供能环境，基本满足体外受精技术的需求。但两个突出的问题在于：1，对精子运动能力的改善不够；2，受精后的合子发育成囊胚阶段的比率(囊胚率)有待提高。因此，开发一种提高小鼠精子活力和囊胚率的培养体系就显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高小鼠精子活力及囊胚率的体外培养试剂盒及应用。

本发明提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒，包括a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重组蛋白和d微克的DPEP2重组蛋白。a:b:c:d＝2:20:1:2。

ERO1L重组蛋白为内质网氧化还原酶1类似蛋白，在美国国立生物技术信息中心建立的DNA序列数据库中的基因ID为50527。DPEP2重组蛋白为二肽酶-2，在美国国立生物技术信息中心建立的DNA序列数据库中的基因ID为319446。

进一步地，a＝10，b＝100，c＝5，d＝10。

该提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法的具体步骤如下：

步骤一、将a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重组蛋白和d微克的DPEP2重组蛋白在37℃的环境下混合，并静置30分钟，得到小鼠精子培养液。a:b:c:d＝2:20:1:2。

步骤二、在小鼠精子培养液中吸取出精子获能滴、受精滴、洗滴。

步骤三、取小鼠精子加入精子获能滴中，并在37℃环境下培养90分钟。

步骤四、用三滴洗滴依次洗涤小鼠卵细胞后，然后将小鼠卵细胞置入受精滴中。

步骤五、吸取5～15ul经步骤三处理后含有精子的精子获能滴，并添加到受精滴中，使得添加精子获能滴后，受精滴内的精子浓度为1×10⁶～5×10⁶/ml。

步骤六、将经步骤五处理后含有精子获能滴的受精滴放入培养箱受精4～5小时。

进一步地，一滴精子获能滴的体积为150ul。一滴受精滴的体积为100ul。一滴洗滴的体积为50ul。

进一步地，所述的小鼠精子取自雄性8周龄、饲养环境为SPF级别的CD1小鼠体内。