[发明专利]提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒，包括a毫升的mHTF和b毫克的BSA，其特征在于：还包括c微克的ERO1L重组蛋白和d微克的DPEP2重组蛋白；a:b:c:d＝2:20:1:2；ERO1L重组蛋白为内质网氧化还原酶1类似蛋白，在美国国立生物技术信息中心建立的DNA序列数据库中的基因ID为50527；DPEP2重组蛋白为二肽酶-2，在美国国立生物技术信息中心建立的DNA序列数据库中的基因ID为319446。

2.根据权利要求1所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒，其特征在于：a＝10，b＝100，c＝5，d＝10。

3.如权利要求1所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤一、将a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重组蛋白和d微克的DPEP2重组蛋白在37℃的环境下混合，并静置30分钟，得到小鼠精子培养液；a:b:c:d＝2:20:1:2；

步骤二、在小鼠精子培养液中吸取出精子获能滴、受精滴、洗滴；

步骤三、取小鼠精子加入精子获能滴中，并在37℃环境下培养90分钟；

步骤四、用三滴洗滴依次洗涤小鼠卵细胞后，然后将小鼠卵细胞置入受精滴中；

步骤五、吸取经步骤三处理后含有精子的精子获能滴，并添加到受精滴中，使得添加精子获能滴后，受精滴内的精子浓度为1×10⁶～5×10⁶/mL；

步骤六、将经步骤五处理后含有精子获能滴的受精滴放入培养箱受精4～5小时。

4.根据权利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法，其特征在于：一滴精子获能滴的体积为150μL；一滴受精滴的体积为100μL；一滴洗滴的体积为50μL。

5.根据权利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法，其特征在于：所述的小鼠精子取自雄性8周龄、饲养环境为SPF级别的CD1小鼠体内。

6.根据权利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法，其特征在于：所述的小鼠卵细胞取自雌性8周龄、饲养环境为SPF级别的CD1小鼠体内。

7.根据权利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子体外培养试剂盒的使用方法，其特征在于：经步骤三操作后，精子获能滴中的精子密度为7.7×10⁷～1.05×10⁸/mL。