[发明专利]一种提高紫花苜蓿游离小孢子出胚率的方法

权利要求书

1.一种提高紫花苜蓿游离小孢子出胚率的方法，其特征在于，该方法包括在紫花苜蓿盛花期，从供体植株上挑选健壮无病虫害花蕾，选取游离小孢子处于单核居中期的花蕾进行培养；

在对所述花蕾进行培养前，对所述花蕾先用75％酒精消毒30s，之后用8％次氯酸钠消毒12min，无菌水冲洗5次后放于无菌研钵中；

培养方法包括在无菌研钵中加入半量MS液体培养基与B5液体培养基，半量MS液体培养基与B5液体培养基的体积比为1:1，用研棒轻轻挤压使小孢子游离于混合培养基溶液中，用400目孔径尼龙网纱过滤收集滤液，离心3次，每次3min，然后将滤液悬浮于半量MS液体培养基与半量NLN液体培养基所组成的混合培养基中，半量MS液体培养基与半量NLN液体培养基的体积比为1: 1，调整小孢子在半量MS液体培养与半量NLN液体培养基所组成的混合培养基中密度至1×10⁴个/mL；

其中，培养方法包括向半量MS液体培养与半量NLN液体培养基所组成的混合培养基中添加100μL质量浓度为 2％的活性炭，封口，4℃低温暗培养24h后，转到35℃高温暗培养72h，再转到25℃暗培养直至出胚；在游离小孢子出胚3周后，将胚转至B5固体培养基中，在25℃、光照16h/d条件下培养成再生植株。

2.根据权利要求1所述的提高紫花苜蓿游离小孢子出胚率的方法，其特征在于，小孢子在半量MS液体培养与半量NLN液体培养基所组成的混合培养基中培养时，将接种有小孢子的半量MS 液体培养与半量NLN液体培养基所组成的混合培养基分装于无菌、直径为60mm的培养皿中，每皿 2mL。

3.根据权利要求1所述的提高紫花苜蓿游离小孢子出胚率的方法，其特征在于，在紫花苜蓿盛花期，从供体植株上摘取健壮无病虫害花蕾的时间为于晴天上午8:00-10:00从供体植株上摘取。