[发明专利]一种耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法

权利要求书

1.一种耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，包括耐高渗菌的驯化方法和透明质酸的生产方法；其特征在于所述耐高渗菌的驯化方法包括在培养基中加入NaCl对菌种进行驯化处理，所述透明质酸的生产方法包括将所述驯化菌种接种到种子罐培养，最后将种子罐的菌种转种到发酵罐培养，经过发酵培养并获得含有透明质酸的发酵液；所述菌种为兽疫链球菌；

所述耐高渗菌的驯化方法的操作步骤为：

(1)将低温保藏的菌种进行活化处理；

(2)将步骤（1）获得的菌种接种于多个活化平板上，筛选出生长较好菌落，淘汰其它菌落；

(3)将步骤（2）筛选出的菌落接于低盐平板培养基上，所述低盐平板培养基的NaCl的浓度为1-5g/L，筛选出生长较好的耐低盐菌落；将这些菌落接种于斜面进行培养，将斜面菌落分别接种于低盐摇瓶进行发酵，挑取产量最高的菌落作为耐低盐菌株进行保藏；

(4)将步骤（3）筛选出的菌落接于高盐平板培养基上，所述高盐平板培养基的NaCl的浓度为15-20g/L，筛选出生长较好耐高盐菌落；将这些菌落接种于斜面进行培养，将斜面菌落分别接种于高盐摇瓶进行发酵，挑取产量最高的菌落作为耐高盐菌株进行保藏；

(5)将步骤（4）筛选出的菌落接于含有高盐的摇瓶培养基进行驯化，培养结束后进行平板划线分离单菌落，筛选出长势较好的菌落；将这些菌落接种于斜面进行培养，将斜面菌落分别接种于高盐摇瓶进行发酵，最后挑取产量最高的菌落作为驯化菌株进行保藏。

2.根据权利要求1所述的耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述低盐平板培养基、高盐平板培养基和活化平板的培养基的成分均为葡萄糖5-20g/L，酵母粉1-10g/L，蛋白胨5～20g/L，K₂HPO₄ 1-5g/L，MgSO₄ 0.1-1g/L，琼脂 0.5-2g/L和NaCl；所述低盐平板培养基的NaCl为5-10 g/L；高盐平板培养基的NaCl为15-20 g/L；活化平板培养基的NaCl为0 g/L。

3.根据权利要求1中所述耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述低盐摇瓶培养基和高盐摇瓶培养基成分均为葡萄糖5-50g/L，酵母粉1-10g/L，蛋白胨5～20 g/L，K₂HPO₄ 1-5g/L，MgSO₄ 0.1-1g/L；所述低盐摇瓶培养基的NaCl为5-10 g/L；所述高盐摇瓶培养基的NaCl为15-20 g/L。

4.根据权利要求1所述耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述培养条件为35-38℃下培养15-30h。

5.根据权利要求1中所述耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述种子罐的培养基的组成为每L含有：葡萄糖5～15g，酵母粉5～10g，蛋白胨5～20g，K₂HPO₄ 1～5g，MgSO₄ 0.1-1g，NaCl 15-20g；培养条件为温度35-38℃，并用30%的NaOH控制pH6.0～8.0，通风发酵时间为8-12h。

6.根据权利要求1中所述耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述发酵罐的培养基的组成为每L含有：葡萄糖30-100g，酵母粉5-10g，蛋白胨5～20g，K₂HPO₄ 1-5g，MgSO₄ 0.1-1g，NaCl 15-20g/L；转种量为15%，发酵培养温度为33-38℃，并用30%的NaOH控制pH6.0～8.0，通风发酵14-30h。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述耐高渗菌的驯化及提高透明质酸产量的生产方法，其特征在于所述获得发酵液粘度达到50000-70000mPa.s，透明质酸钠含量达到14-20g/L。