[发明专利]一种催化效率提高的D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体

权利要求书

1.一种D-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体酶，其特征在于，是将来源于微生物Doreasp.的D-阿洛酮糖3-差向异构酶的A38位的丙氨酸Ala替换成谷氨酸Glu，同时G105位的甘氨酸Gly替换为丙氨酸Ala，获得双点突变体酶；编码所述D-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体酶的基因序列如SEQ ID No:3所示，突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

2.编码权利要求1所述突变体酶的基因。

3.携带权利要求2所述基因的质粒。

4.携带权利要求2所述基因的微生物细胞。

5.一种表达权利要求1所述突变体酶的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，转化重组表达质粒pET-22b(+)-A38E/G105A。

6.权利要求1所述突变体酶的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)在Dorea sp.DPEase酶模拟结构的基础上确定突变位点；

(2)以重组质粒pET22b-dore-dpe为模板，设计正向和反向引物，使用两步法对Doreasp.DPEase进行定点突变；

(3)将构建成功的突变体质粒导入表达宿主E.coliBL21(DE3)，挑选验证后的阳性单克隆进行诱导表达培养；

(4)离心菌体，重悬后超声破碎，镍离子亲和层析纯化得到突变体酶A38E/G105A；所述重组质粒pET22b-dore-dpe的构建方法：根据登录号：CBGJ010000047.1的基因序列，合成其D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因片段BN605_00564，并连接至pET-22b(+)的酶切位点Nde I和Xho I之间。

7.权利要求1所述突变体酶在制备D-阿洛酮糖中的应用。

8.权利要求3所述质粒在制备D-阿洛酮糖中的应用。

9.权利要求4所述微生物细胞在制备D-阿洛酮糖中的应用。

10.权利要求1所述突变体酶在化学、食品和制药领域中的应用。

11.权利要求5所述重组大肠杆菌在制备D-阿洛酮糖中的应用。