[发明专利]用于提高靶mRNA的蛋白质表达水平的融合蛋白

说明书

[技术问题]本发明解决了开发用于控制靶RNA的方法的问题。[技术方案]提供了融合蛋白，其包含：提高mRNA的蛋白质表达的功能结构域；和对于靶mRNA而言，能够选择性结合RNA碱基或特异性结合RNA碱基序列的PPR蛋白。

技术领域

本发明涉及用于提高靶mRNA的蛋白质表达水平的融合蛋白。

背景技术

近年来建立并使用了通过多种分析显示的结合核酸的蛋白质因子与目的序列结合的技术。使用这种序列特异性结合在一定程度上能够除去靶DNA序列或能够调节(激活或失活)靶DNA序列下游存在的编码蛋白质的基因的表达。

虽然已知锌指核酸酶(ZFN)、TAL效应核酸酶(TAL effector nuclease，TALEN)、Crispr-cas9等作为使用作用于DNA的蛋白质因子的技术，但使用特异性作用于RNA的蛋白质因子的技术的开发仍然是有限的。

本发明人已经提出了利用PPR蛋白(具有一个或更多个五肽重复区(pentatricopeptide repeat，PPR)基序的蛋白质)的特性设计可以特异性结合靶RNA序列的蛋白质的方法，所述PPR蛋白是主要存在于植物中的蛋白质(专利文献1)。

[引用列表]

[专利文献]

[专利文献1]

WO2013/058404

[发明内容]

[技术问题]

在根据专利文献1的公开内容中，鉴定了当PPR基序表现出RNA结合特性时起作用的氨基酸，并且显示了PPR基序的结构与靶碱基之间的关系，从而能够构建具有一个或更多个PPR基序并且可以与具有任何序列和长度的RNA结合的蛋白质。然而，尚未发现使用根据专利文献1的技术实际调节靶RNA的方法。

[问题的解决方案]

作为对使用PPR蛋白提高靶mRNA的蛋白质表达水平的方法的广泛研究的结果，本发明人发现预定功能结构域和PPR蛋白的融合蛋白提高了靶mRNA的蛋白质表达水平，并已经完成了本发明。

具体地，本发明的一个实施方案涉及用于提高靶mRNA的蛋白质表达水平的融合蛋白，所述融合蛋白包含：

(A)一种或更多种提高mRNA的蛋白质表达水平的功能结构域；和

(B)可以以RNA碱基选择性或RNA碱基序列特异性方式与靶mRNA结合的多肽部分，

其中多肽部分(B)是包含一个或更多个PPR基序的多肽部分，每个PPR基序包含长度上由30至38个氨基酸组成并且由式1表示的多肽：

[式1]

(螺旋A)-X-(螺旋B)-L (式1)

其中

螺旋A是长度上由12个氨基酸组成并且可以形成α-螺旋结构的部分，并且由式2表示：

[式2]

A₁-A₂-A₃-A₄-A₅-A₆-A₇-A₈-A₉-A₁₀-A₁₁-A₁₂ (式2)

其中A₁至A₁₂各自独立地表示氨基酸；

X不存在，或者是长度上由1至9个氨基酸组成的部分；