[发明专利]含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉质性状的检测试剂盒在审
| 申请号： | 201711463968.8 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108048577A | 公开（公告）日： | 2018-05-18 |
| 发明（设计）人： | 刘武军;马海玉;方超;方丽君;赵国艺;刘玲玲;于茜;褚洪忠 | 申请（专利权）人： | 新疆农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | sec62 基因 用于 提高 阿勒泰 羊肉 性状 检测 试剂盒 | ||
1.含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉质性状的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：
（1）特异性引物：
SEC62特异性引物：
上游引物F：5'-GATAGCAGCCACCCTCTTCC-3'；
下游引物R：5'-ACGAGCAACAGCAAGGAGAA-3'；
（2）cDNA模板；
（3）荧光定量PCR反应液和无RNA酶水。
2.如权利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉质性状的检测试剂盒，其特征在于，所述的荧光定量PCR反应液为2.5×Real Master Mix。
3.如权利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉质性状的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括2.5×Real Master Mix10μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl。
4.一种如权利要求1所述含SEC62基因用于提高阿勒泰羊肉质性状的检测试剂盒的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）cDNA提取：采取阿勒泰羊血样5ml，提取RNA，在-80℃保存；反转录为cDNA，用内参基因ACTB进行PCR扩增；
（2）SEC62基因PCR扩增：特异性扩增SEC62基因的两个片段；反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度30s、72℃延伸1min，循环31次，72℃延伸5min，4℃保存；
（3）荧光定量PCR检测：在96孔板中分别加入一下荧光定量PCR反应体系：2.5×RealMasterMix(SYBR Green) 10μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl，加水至总体积20μl；循环条件为95℃预变性30s；95℃变性5s；60℃退火30s共42个循环；最后在95℃10s、65℃5s、94℃5s，作熔解曲线；
（4）基因表达量与蛋白质含量及氨基酸含量的关联分析：对SEC62基因在阿勒泰羊股四头肌中的表达量与必须氨基酸含量进行显著性检验。
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