[发明专利]一种酶活提高的L-天冬氨酸α-脱羧酶变体及其构建方法有效
| 申请号： | 201711350235.3 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN107988194B | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;张腾辉;张显;杨套伟;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 天冬氨酸 脱羧酶 变体 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.一种含有权利要求2所述基因的重组表达载体。
4.一种表达权利要求1所述L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体的基因工程菌。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。
6.一种制备权利要求4所述基因工程菌的方法，其特征在于，是在SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的基础上，将编码第56位的谷氨酸的密码子突变成了编码丝氨酸的密码子，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到大肠杆菌宿主菌中即得到大肠杆菌基因工程菌。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述方法具体是： (1)以SEQ ID NO.4所示核酸序列为模板，以序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的引物，进行PCR，得到编码第56位谷氨酸突变成丝氨酸的E56S突变体基因序列；(2)将步骤(1)得到的重组基因序列，连接到pET-28a表达载体中，得到重组质粒pET28a-E56S，重组质粒化转化到大肠杆菌宿主中，获得重组大肠杆菌基因工程菌。
8.权利要求1所述L-天冬氨酸α-脱羧酶突变体在制备泛酸钙、肌肽、帕米磷酸钠、β-丙氨酸金属配合物或巴柳氮中的应用。
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