[发明专利]提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法及应用

权利要求书

1.一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法，其方法是：特异性扩增EGFR基因19缺失突变位点区域的前引物和后引物，所述的前引物末端与野生型不匹配而与突变型匹配，特别的与常规的ARMS引物相比，本引物末端多出2个错配位点，并在第4位人为的再引入一个错配，大大提高了其特异性，有效的防止野生型对检测的影响。该特异性前引物和后引物一起扩增包含基因突变位点在内的扩增产物的长度为50-200bp；特异性针对扩增产物的taqman探针，其Tm高于引物9-12℃，所述的探针携带能检测的荧光标记。

2.如权利要求1所述的一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法，其方法是：所述的前引物为ARMS引物，与突变基因存在一个碱基的不同其余完全互补，长度为17-25bp。

3.如权利要求1、2所述的一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法，其方法是：所述的前引物为ARMS引物，与突变基因存在一个碱基的不同其余完全互补，长度较佳地为18-22bp。

4.如权利要求1所述的一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法，其方法是：探针序列前引物及后引物序列如下：

探针

FAM-CGATGTGAGTTTCTGCTTTGCTGTGTG-BHQ1

后引物

R1：5’-ATGAGAAAAGGTGGGCCTGA-3’

R2：:5’-CTGAGGTTCAGAGCCATG-3’

前引物

2237-2251DEL15 5’-GTCGCTATCAAGGCAGCTC-3’。

5.一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法的应用，其应用是：

(1)提供上述引物和探针；

(2)待测样品的处理和模板的提取；

(3)配制荧光定量PCR反应体系；

(4)用步骤(1)的引物和探针扩增待测的突变基因靶序列；

(5)利用ARMS引物区分野生型和突变型基因序列，通过监测反应过程中的荧光强度变化来区分野生型和突变型。

6.如权利要求5所述的一种提高EGFR基因19外显子缺失突变检测特异性的方法的应用，其应用是：

经过优化得到的最佳的反应体系为：

其中所用的酶为TAKALA的rTaq酶，总体系为25ul，在保证各组分浓度不变的情况下，也可调整为20ul，也能取得良好的结果；

经过优化得到的反应程序

94℃ 3min

94℃ 30s

60℃ 10s

40个循环并且在第三步60℃10s结束时收集检测FAM荧光。