[发明专利]一种提高猪卵母细胞体外成熟质量和发育潜力的培养液及其培养方法

权利要求书

1.一种猪卵母细胞体外成熟促进剂，其特征在于，所述促进剂由2.5μmol/L毛喉素与100nmol/L曲古抑菌素A组成。

2.权利要求1所述促进剂在制备猪卵母细胞体外成熟培养液中的应用。

3.一种猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述培养液包括以下组分：毛喉素2.5μmol/L，曲古抑菌素A 100nmol/L，TCM-199 8～12g/L，NaHCO₃ 1～4g/L，D-葡萄糖0.4～0.7g/L，丙酮酸钠0.05～0.15g/L，青霉素钠盐0.05～0.1g/L，链霉素硫酸盐0.03～0.07g/L，聚乙烯醇1～4g/L，促黄体素0.3～0.7μg/mL，促卵泡素0.3～0.7μg/mL，表皮生长因子8～12ng/mL，L-半胱氨酸0.3～0.7mmol/L，卵泡液8～12％。

4.根据权利要求3所述的培养液，其特征在于，所述培养液包括以下组分：毛喉素2.5μmol/L，曲古抑菌素A 100nmol/L，TCM-199 9～11g/L，NaHCO₃ 2～3g/L，D-葡萄糖0.5～0.6g/L，丙酮酸钠0.08～0.12g/L，青霉素钠盐0.06～0.09g/L，链霉素硫酸盐0.04～0.06g/L，聚乙烯醇1～3g/L，促黄体素0.4～0.6μg/mL，促卵泡素0.4～0.6μg/mL，表皮生长因子9～11ng/mL，L-半胱氨酸0.4～0.6mmol/L，卵泡液9～11％。

5.根据权利要求3所述的培养液，其特征在于，所述培养液包括以下组分：毛喉素2.5μmol/L，曲古抑菌素A 100nmol/L，TCM-199 9.87g/L，NaHCO3 2.2g/L，D-葡萄糖0.5496g/L，丙酮酸钠0.1g/L，青霉素钠盐0.075g/L，链霉素硫酸盐0.05g/L，聚乙烯醇1g/L，促黄体素0.5μg/mL，促卵泡素0.5μg/mL，表皮生长因子10ng/mL，L-半胱氨酸0.57mmol/L，卵泡液10％。

6.权利要求3～5任一所述培养液在提高猪卵母细胞体外成熟质量与发育潜力中的应用。

7.一种提高猪卵母细胞体外成熟质量与发育潜力的方法，其特征在于，将权利要求3～5任一所述的培养液作为培养液A，将猪卵母细胞在培养液A中培养22～24h后转入到培养液B中继续培养22～24h；

所述培养液B包括以下组分：TCM-199 8～12g/L，NaHCO₃ 1～4g/L，D-葡萄糖0.4～0.7g/L，丙酮酸钠0.05～0.15g/L，青霉素钠盐0.05～0.1g/L，链霉素硫酸盐0.03～0.07g/L，聚乙烯醇1～4g/L，表皮生长因子9～11ng/mL，卵泡液9～11％。

8.根据权利要去7所述的方法，其特征在于，所述培养液A或/和培养液B配制好后需置于CO₂培养箱平衡过夜。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述CO₂培养箱中的条件为38.6℃，5％CO₂，相对湿度100％。

10.权利要求7～9任一所述的方法在猪克隆胚胎培养中的应用。