[发明专利]一种提高植物抵御RNA病毒的能力的方法

权利要求书

1.一种提高植物抵御RNA病毒的能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1从待抵御的RNA病毒的基因组序列中选取若干靶序列，针对若干所述靶序列，分别设计合成与所述靶序列反向互补的DNA片段，所述DNA片段为双链DNA，所述靶序列的序列排列规则为5’-N_X-C-3’；

其中，N_X表示X个连续的核糖核苷酸，N表示A、G、C、U中的任一种，10≤X≤30，且X为整数；

S2将步骤S1中获得的若干个所述DNA片段分别构建到用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体中，得到若干个重组载体；

S3将若干个所述重组载体分别导入受体植物，从导入所述重组载体的受体植物中获得对所述RNA病毒抵御能力提高的植物。

2.根据权利要求1所述的提高植物抵御RNA病毒的能力的方法，其特征在于，所述重组载体能转录向导RNA和表达FnCas9蛋白，所述向导RNA为由crRNA和tracrRNA通过碱基配对结合而成的具有回文结构的RNA；所述crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段。

3.根据权利要求1所述的提高植物抵御RNA病毒的能力的方法，其特征在于，该方法用于提高植物抵御RNA病毒能力，包括以下步骤：

S11获得目的DNA片段：

S101从待抵御的RNA病毒的基因组序列中选取若干靶序列，针对各靶序列，分别设计合成与所述靶序列反向互补的DNA片段，所述DNA片段为双链DNA；

所述靶序列的序列排列规则为5’-N_X-C-3’，其中，N_X表示X个连续的核糖核苷酸，N表示A、G、C、U中的任一种，15≤X≤25，且X为整数；

S102将步骤S101中获得的若干个所述DNA片段分别构建到用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体中，得到若干个重组载体一；

所述重组载体一能转录向导RNA和表达FnCas9蛋白，所述向导RNA为由crRNA和tracrRNA通过碱基配对结合而成的具有回文结构的RNA，所述crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段；

S103将若干个所述重组载体一分别导入受体植物一中，从导入所述重组载体一的受体植物一中获得对所述RNA病毒抵御能力提高的植物，记为目的植物；

在所述目的植物中，被导入的所述重组载体一上携带的所述DNA片段记为目的DNA片段；

S12按照步骤S102和S103的方法将所述目的DNA片段导入所述用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体中，获得重组载体二，将所述重组载体二导入受体植物二，提高受体植物二对所述RNA病毒的抵御能力；

所述受体植物一与所述受体植物二为同一种受体植物，或者所述受体植物一与所述受体植物二为不同种受体植物；

从导入所述重组载体一的受体植物一中获得对所述RNA病毒抵御能力提高的植物的方法包括以下步骤：

S201设置对照组植物，对照组植物为向所述受体植物一中导入空载体，所述空载体为用于表达CRISPR/Cas9核酸酶的载体；

S201向若干导入所述重组载体一的受体植物一中分别导入表达所述RNA病毒的表达载体，得到植物A，向导入所述空载体的受体植物一中导入所述表达载体，得到植物B；

S203检测所述植物A和所述植物B中所述RNA病毒的含量，从所述植物A中选出RNA病毒含量显著低于所述植物B中RNA病毒含量的个体，记为植物A’，其中显著性水平P<0.05，所述植物A’为对所述RNA病毒抵御能力提高的植物；

S204在S102中，在所述受体植物二中，由所述重组载体二转录出向导RNA，并表达出所述FnCas9蛋白；由所述向导RNA和所述FnCas9蛋白形成的CRISPR/Cas9核酸酶能够抑制所述RNA病毒在所述受体植物二体内的复制，提高所述受体植物二对所述RNA病毒的抵御能力。

4.根据权利要求3所述的提高植物抵御RNA病毒的能力的方法，其特征在于，S203中，从所述植物A中选出RNA病毒含量显著低于所述植物B中RNA病毒含量的个体，记为植物A’，其中显著性水平P<0.01，所述植物A’为对所述RNA病毒抵御能力提高的植物。