[发明专利]一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法

说明书

一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，将黑曲霉菌株通过斜面培养，摇瓶培养，种子罐培养，制得种子液，再经含有肌醇的发酵培养基进行发酵培养，获得高酶活的蛋白酶，本发明在发酵培养基中添加了生长因子源肌醇，提高黑曲霉的生命强度，增加蛋白酶的生产活力，从根本上提高蛋白酶的发酵水平，获得的蛋白酶酶活为10000‑20000U/g，蛋白酶酶活增加了100‑300％，具有良好的稳定性，同时，本发明利用液态发酵的方法，具有发酵时间短，机械化程度高，便于自动控制，容易获得高活力的蛋白酶产品，生产效率高的优点。

技术领域

本发明属于蛋白酶的生产领域，具体涉及一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法。

背景技术

在工业用酶当中，蛋白酶是应用最广的一种，约占整个酶制剂产量的60％以上，广泛应用于食品、饲料、纺织等领域。

生产用蛋白酶主要来源于动物的脏器和微生物生长分泌产生，许多微生物都具有产蛋白酶的能力，目前研究和应用较多的是产蛋白酶真菌，以黑曲霉最为常用。

现有技术中生产的蛋白酶多采用固态发酵，然而，随着食品、畜牧业等行业的不断发展，蛋白酶的需求量也不断上升，由于受酶活及酶适用条件的限制，仍无法满足工业生产的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，采用液态发酵的方法，利用肌醇提高黑曲霉的产蛋白酶能力，获得的蛋白酶酶活为10000-20000U/g，蛋白酶酶活增加了100-300％。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种提高黑曲霉生产蛋白酶能力的方法，包括以下步骤：

1)斜面培养

将黑曲霉菌株接种到固体斜面培养基上，28～30℃下恒温培养24-48h；

2)摇瓶培养

取步骤1)中培养后的黑曲霉菌株，接种到种子培养基中，置于温度28～30℃，150-220r/min条件下摇瓶培养24-48h；

3)种子罐培养

取步骤2)中摇瓶培养后的黑曲霉菌株，按照接种量3-6％的比例接入种子罐培养基中，于28～30℃、转速150-250rpm条件下培养48-72h，获得种子液；

4)发酵培养

取步骤3)中的种子液，按照接种量3-6％的比例接入发酵培养基，进行好氧发酵，获得蛋白酶；其中，发酵培养基中含有肌醇0.1-1wt.％。

本发明获得的蛋白酶酶活为10000-20000U/g。

进一步，步骤1)中的斜面培养基的组分及配制过程为：按重量份，马铃薯100-200份，葡萄糖10-20份，琼脂10-20份，MgSO₄ 0.2-1.0份，NaCl 0.5-1份，FeSO₄ 0.002-0.05份，K₂HPO₄ 0.3-1.2份，将上述各组分溶于1000-1500份水中，混合均匀，自然pH值，于110-130℃灭菌20-30min。

优选的，步骤2)中摇瓶种子培养基的组分及配制过程为：按重量份，蛋白胨10-15份，酵母提取物5-8份，NaCl 5-10份，将上述组分溶于1000-1500ml水中，自然pH值，于110-130℃灭菌20-30min。

优选的，步骤3)中所述种子罐培养基的组分及配制过程为：按质量百分数，麸皮2-5％，豆粕3-8％，KH₂PO₄ 0.2-0.5％，水85-95％，自然pH值，110-130℃灭菌20-30min。