[发明专利]一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法

权利要求书

1.一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，包括以下步骤：

1)斜面培养

将黑曲霉菌株接种到固体斜面培养基上，28～30℃下恒温培养24-48h；所述固体斜面培养基组成为：按重量份，马铃薯100-200份，葡萄糖10-20份，琼脂10-20份，MgSO₄ 0.2-1.0份，NaCl 0.5-1份，FeSO₄0.002-0.05份，K₂HPO₄ 0.3-1.2份；

2)摇瓶培养

取步骤1)中培养后的黑曲霉菌株，接种到种子培养基中，置于温度28～30℃，150-220r/min条件下摇瓶培养24-48h；

3)种子罐培养

取步骤2)中摇瓶培养后的黑曲霉菌株，按照接种量3-6％的比例接入种子罐培养基中，于28～30℃、转速150-250rpm条件下培养48-72h，获得种子液；

4)发酵培养

取步骤3)中的种子液，按照接种量3-6％的比例接入发酵培养基，进行好氧发酵，获得蛋白酶；其中，发酵培养基中含有肌醇0.1-1wt.％。

2.根据权利要求1所述的提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，获得的蛋白酶酶活为10000-20000U/g。

3.根据权利要求1所述的提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，步骤1)中的固体斜面培养基的配制过程为：将固体斜面培养基各组分溶于1000-1500份水中，混合均匀，自然pH值，于110-130℃灭菌20-30min。

4.根据权利要求1所述的提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，步骤2)中摇瓶种子培养基的组分及配制过程为：按重量份，蛋白胨10-15份，酵母提取物5-8份，NaCl 5-10份，将上述组分溶于1000-1500份水中，自然pH值，于110-130℃灭菌20-30min。

5.根据权利要求1所述的提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，步骤3)中所述种子罐培养基的组分及配制过程为：按质量百分数，麸皮2-5％，豆粕3-8％，KH₂PO₄ 0.2-0.5％，水85-95％，自然pH值，110-130℃灭菌20-30min。

6.根据权利要求1所述的提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，

步骤4)中发酵培养基的组分及配制过程为：按质量百分数，麸皮2-5％，豆粕3-5％，玉米粉2-4％，KH₂PO₄ 0.3-0.8％，肌醇0.1-1％，水85-95％，自然pH值，110-130℃灭菌20-30min。

7.根据权利要求1-6任一项所述提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法，其特征在于，步骤4)中，好氧发酵条件为：30-45℃、自然pH值，通风量0.02-0.35vvm，转速为150-250rpm，发酵时间为48-72h。