[发明专利]利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法和制备生物饲料的方法

权利要求书

1.一种利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，包括：

1)将第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻在光照下进行第一轮菌藻共培养，菌藻比为10～1000：1，培养结束后，得到第一轮菌藻共培养液；

2)在第一轮菌藻共培养液中再补加第二次加入的水稻内生泛菌，第二次加入的水稻内生泛菌和第一次加入的水稻内生泛菌的比为0.25～4：1，在光照下进行第二轮菌藻共培养，培养结束后，得到第二轮菌藻共培养液；

3)对第二轮菌藻共培养液进行细胞分离，得到小球藻细胞沉淀和内含水稻内生泛菌的上清菌液；

所述水稻内生泛菌为中国农业微生物保藏中心编码为10454的水稻内生泛菌菌种；所述小球藻为蛋白核小球藻。

2.根据权利要求1所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的第一轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为6～12天。

3.根据权利要求1所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，步骤2)中，所述的第二轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为2～12天。

4.根据权利要求1所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的细胞分离包括：第二轮菌藻共培养液先在超声波条件下处理，之后离心，得到小球藻细胞沉淀和内含水稻内生泛菌的上清菌液。

5.根据权利要求4所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，所述的超声波条件为：在140W～180W、30kHz～50kHz超声波条件下处理15s～45s。

6.根据权利要求4所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法，其特征在于，所述的离心为在1000～1400r/min低速离心3～10min。

7.一种制备生物饲料的方法，其特征在于，包括：

1)根据权利要求1～6任一项所述的利用两轮加菌共培养提高小球藻产量的方法制备得到小球藻细胞沉淀；

2)将小球藻细胞沉淀经洗涤、离心和干燥后得到小球藻细胞干品，将小球藻细胞干品制成生物饲料。

8.根据权利要求7所述的制备生物饲料的方法，其特征在于，所述的洗涤、离心和干燥为：将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经6000～10000r/min离心5～20min后收集，之后在30℃～50℃低温条件下烘干，得到小球藻藻细胞干品。